【摘 要】
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根据GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）基因序列设计并合成1对特异性引物,进行PCR扩增,从PCV2突变株中扩增出PCV2 Rep基因,对PCR扩增产物清洁后进行双酶切,连接到pEGFP-C1载体
【机 构】
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上海海洋大学水产与生命学院,上海市农业科学院畜牧兽医研究所
【基金项目】
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上海市科学技术委员会重点科技攻关项目(12391901900)
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根据GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）基因序列设计并合成1对特异性引物,进行PCR扩增,从PCV2突变株中扩增出PCV2 Rep基因,对PCR扩增产物清洁后进行双酶切,连接到pEGFP-C1载体上,转化到大肠杆菌DHSα感受态细胞中,经PCR筛选和测序后鉴定出正确的重组基因,完成真核表达载体的构建。将重组质粒转染到PK15细胞中,收取病毒液抽提DNA,PCR检测到Rep基因,证明转染是成功的。进行间接免疫荧光试验,可以检测Rep基因在PK15细胞中的表达,试验结果很好的验证了Rep基因的免疫原
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