【摘 要】
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目的:探讨不同厚度荚膜的鲍曼不动杆菌诱导鼠Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡的能力及潜在的机制.方法:从肺炎患者痰液中分离鉴定鲍曼不动杆菌,以刚果红染色法染色细菌荚膜并筛
【机 构】
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江苏大学医学院,江苏 镇江212013;扬州市江都人民医院神经内科,江苏 扬州225200;江苏大学医学院,江苏 镇江,212013;扬州市江都人民医院神经内科,江苏 扬州,225200;江苏大学附属
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目的:探讨不同厚度荚膜的鲍曼不动杆菌诱导鼠Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡的能力及潜在的机制.方法:从肺炎患者痰液中分离鉴定鲍曼不动杆菌,以刚果红染色法染色细菌荚膜并筛选荚膜厚度显著不同的菌株用于后续研究.分别以厚荚膜株(Ab-H株)和薄荚膜株(Ab-B株)感染Raw 264.7细胞,于感染后1 h、3 h和6 h时收集细胞,采用免疫印迹法检测细胞自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达,以及PI3K、Akt和mTOR磷酸化水平,采用流式细胞术检测细胞活性氧生成量和凋亡率.结果:鲍曼不动杆菌经刚果红染色后,菌体染成紫黑色,背景染成红色,荚膜不着色,可以清晰地观察到细菌荚膜厚度.筛选出两株荚膜厚度差异显著的鲍曼不动杆菌,分别为Ab-H株和Ab-B株.上述菌株感染Raw 264.7细胞后均可以诱导细胞自噬和凋亡,并增加细胞活性氧生成量,PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平受到显著抑制,且抑制作用随着时间延长而增加(P<0.05).Ab-H株细胞凋亡率、自噬相关蛋白Becline-1表达量和活性氧生成量显著高于Ab-B株(P<0.05).结论:鲍曼不动杆菌能够诱导Raw 264.7细胞自噬和凋亡的发生,诱导能力与细菌荚膜厚度呈正相关;厚荚膜鲍曼不动杆菌有更强的诱导Raw 264.7细胞活性氧生成能力,以及抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化能力,最终导致Raw 264.7细胞自噬和凋亡.
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