【摘 要】
：
目的:基于磷脂酰肌醇3,激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨肝豆扶木汤(GDFMD)对氯化铜(CuCl2)诱导的人肝癌细胞(HepG2)氧化损伤的保护作用.方法:HepG2细胞分为空白组,模型组,GDFMD组,PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235(10 nmol·L-1)组,GDFMD+NVP-BEZ235 (10 nmol·L-1)组.采用200 μ mol·L-1 CuCl2构建模型组铜负荷HepG2细胞,酶联免疫吸附测定法(ELISA)观察细
【机 构】
：
安徽中医药大学第一附属医院,合肥230031;安徽中医药大学研究生院,合肥230012
论文部分内容阅读
目的:基于磷脂酰肌醇3,激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨肝豆扶木汤(GDFMD)对氯化铜(CuCl2)诱导的人肝癌细胞(HepG2)氧化损伤的保护作用.方法:HepG2细胞分为空白组,模型组,GDFMD组,PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235(10 nmol·L-1)组,GDFMD+NVP-BEZ235 (10 nmol·L-1)组.采用200 μ mol·L-1 CuCl2构建模型组铜负荷HepG2细胞,酶联免疫吸附测定法(ELISA)观察细胞超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;免疫荧光观察细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K,磷酸化Akt(p-Akt)/Akt,磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ,p62表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞PI3K,Akt,mTOR,Beclin-1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ,p62 mRNA表达.结果:与空白组比较,模型组细胞SOD,GSH-Px活性下降,MDA含量显著升高(P＜0.01);与模型组比较,10％ GDFMD含药血清组SOD,GSH-Px活性升高,MDA含量下降(P＜0.05,P＜0.01);NVP-BEZ235组GSH-Px活性下降,MDA含量升高(P＜0.05).与空白组比较,模型组p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR,p62表达水平显著降低,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,10％ GDFMD组p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR,p62表达水平升高,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ表达水平下降(P＜0.05,P＜0.01);NVP-BEZ235组p-PI3K/PI3K,p-mTOR/mTOR表达水平下调,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ表达水平升高(P＜0.05,P＜0.01).与10％ GDFMD组比较,10％ GDFMD+NVP-BEZ235组p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR表达水平下降,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ表达水平升高(P＜0.05,P＜0.01).与空白组比较,模型组LC3Ⅱ蛋白表达显著升高(P.＜0.01);与模型组比较,10％ GDFMD组LC3Ⅱ蛋白表达降低,与10％ GDFMD组比较,10％ GDFMD+NVP-BEZ235组LC3Ⅱ蛋白表达升高.各组PI3K,Akt,mTOR mRNA相对表达量差异无统计学意义,与空白组比较,模型组p62 mRNA相对表达量显著降低,Beclin-1,LC3 Ⅰ,LC3ⅡmRNA相对表达量显著升高(P＜0.01);与模型组比较,10％ GDFMD组p62 mRNA相对表达量升高,Beclin-1,LC3 Ⅰ,LC3ⅡmRNA表达水平下调(P＜0.01);NVP-BEZ235组Beclin-1 mRNA相对表达量升高(P＜0.05).与10％ GDFMD组比较,10％GDFMD+NVP-BEZ235组Beclin-1,LC3ⅡmRNA相对表达量升高(P＜0.01).结论:GDFMD能抑制CuCl2诱导的HepG2细胞过度自噬,减轻细胞氧化损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
其他文献
目的:通过观察银杏蜜环口服溶液对抑郁模型大鼠的影响,探讨银杏蜜环口服溶液抗抑郁的机制.方法:50只SD大鼠,除正常组外,采用孤养结合慢性不可预见性应激(CUMS)大鼠抑郁模型,模型成功的大鼠分为模型组,氟西汀组(10 mg·kg-1),银杏蜜环口服溶液高、低剂量组(618,309 mg·kg-1),每组10只;连续造模21d,刺激第7天给药,以10 mL·kg-1体积连续给药14d,正常组与模型组灌胃蒸馏水;进行糖水偏好实验、旷场实验、悬尾不动实验;苏木素-伊红(HE)染色法观察抑郁大鼠海马组织病理形态变
目的:探讨八仙逍遥汤对急性跟腱断裂术后风寒湿阻型关节僵硬的疗效,以及对肌腱生长相关因子转化生长因子-β1(TGF-β1),胰岛素样生长因子-l(IGF-1),表皮生长因子(EGF)的影响.方法:选取新鲜闭合性跟腱断裂患者66例,根据入院顺序依据随机数字表法将患者分为治疗组与对照组,每组33例,所有患者均行手术切开修补治疗,术后长腿支具固定,第4周调整为靴形支具并调整支具跖屈角度,固定满6周去除支具开展加速康复功能锻炼.治疗组在功能锻炼的基础上给予八仙逍遥汤熏洗患侧跟腱45 d,2次/d,对照组仅进行功能锻
卵巢癌是妇科恶性肿瘤之一,由于其早期症状不典型,确诊时往往已达疾病晚期,成为威胁女性健康的一大杀手.现代研究发现,肿瘤细胞与其周围微环境共同进化是导致卵巢癌发生、发展的重要原因.中医学认为,阴阳是一切事物的根本,阴阳平衡是机体健康的标志,即“阴平阳秘”状态,阴阳的对立制约、互根互用、消长与转化是维持阴阳平衡的关键.卵巢癌在中医学中属“癥瘕”“积聚”“肠蕈”范畴,其发生、发展是正气与邪气抗争,正虚邪盛,阴阳失衡的结果.而机体与卵巢癌炎性微环境,以及炎性微环境中的相关因子也处于对立制约、相互转化的状态,表现出
血压高、水肿、痉挛是妊娠高血压的临床表现,该病可导致胎儿窘迫、胎儿宫内发育迟缓等不良后果,危害母婴安全与健康.高质量的孕产期护理有助于减少并发症的发生,改善妊娠结局.妊娠高血压是妊娠妇女的常见病,如果患病的产妇没有得到及时有效的治疗,会严重危害产妇和胎儿的生命安全和健康.近年来,临床推广应用优质护理,为妊娠高血压患者提供全方位的护理服务,从心理护理、健康知识宣传、饮食指导等方面入手,综合实施,在一定程度上可以减轻患者的不良情绪.这方面的研究专著也相继问世,其中《临床妇产科护理指南》是一部兼顾学术性和实用性
目的:通过模型研究枣分布区与文献记载枣位点相比较,分析枣分布的主要影响因子,拓展对枣分布及影响因素的认识。方法:基于整理文献和标本信息得到枣的200多条分布位点信息,伴随55种环境影响因子,用最大熵(MaxEnt)模型研究影响枣分布的环境因子,用ArcGIS软件分析枣在全国的潜在分布区。依靠受试者工作特征(ROC)曲线和刀切法验证主要环境因子。结果:研究结果的测试集和训练集曲线下面积(AUC)均>
目的:建立脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞的炎症模型,筛选喜碱鸢尾根水提取物抗炎活性部位,并进行化学成分分析.方法:水提醇沉法提取,AB-8型大孔吸附树脂色谱法分离上清液,得上清液浸膏和水,20％乙醇,40％乙醇,60％乙醇洗脱物(YWG,YWG-0％,YWG-20％,YWG-40％,YWG-60％),细胞增殖与活性检测(CCK-8)法测定上清液和不同体积分数乙醇洗脱物对RAW264.7细胞活力的影响,Griess和酶联免疫吸附(ELISA)法分别测定细胞上清液中一氧化氮(NO),肿瘤坏死因子(T