【摘 要】
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目的建立人附睾蛋白4(HE4)杂交瘤细胞株,并对其分泌的HE4单克隆抗体进行鉴定和初步应用,为HE4的功能研究和人源化抗体的制备奠定基础。方法使用pcDNA3.0-HE4重组质粒免疫BALB
【机 构】
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华南师范大学医院,广州市人口和计划生育科学研究所,中山大学中山医学院微生物教研室,中山大学临床检验标准化研究中心,
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目的建立人附睾蛋白4(HE4)杂交瘤细胞株,并对其分泌的HE4单克隆抗体进行鉴定和初步应用,为HE4的功能研究和人源化抗体的制备奠定基础。方法使用pcDNA3.0-HE4重组质粒免疫BALB/C小鼠,采用PEG融合技术建立杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体。通过免疫荧光法、有限稀释法及金标斑点法测定单克隆抗体的交叉反应性及免疫球蛋白的类型和亚类。结果获得2株可稳定分泌HE4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C5和1C8,均为IgMκ类。2株单抗能够与表达HE4蛋白的卵巢癌细胞发生反应,而不与Sp2/0细胞、CHO细胞等发生交叉反应。杂交瘤细胞株1C5培养上清效价为1∶160,腹水效价为1∶1 280,而杂交瘤细胞株1C8培养上清效价为1∶128,腹水效价为1∶1 024。结论成功地制备出两株抗HE4单克隆抗体,均具有良好的特异性,为进一步建立免疫分析方法,进行HE4相关研究奠定了良好的基础。
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