【摘 要】
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目的:在大肠杆菌中表达候选人Era结合蛋白A19/GST融合蛋白, 并制备兔抗A19抗体.方法: 利用人Era蛋白全长作为诱饵, 进行胎肝cDNA文库的酵母双杂交筛选.将得到的候选人Era结合
【机 构】
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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
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目的:在大肠杆菌中表达候选人Era结合蛋白A19/GST融合蛋白, 并制备兔抗A19抗体.方法: 利用人Era蛋白全长作为诱饵, 进行胎肝cDNA文库的酵母双杂交筛选.将得到的候选人Era结合蛋白A19的编码基因序列克隆入pACT2载体中, 构建pACT2-A19.用PCR扩增A19蛋白的编码基因序列, 克隆入融合表达载体pGEX-4T3中, 构建A19的表达菌, 并经IPTG诱导表达A19蛋白.用SDS-PAGE分析及薄层扫描检测目的蛋白的含量.用A19蛋白免疫家兔制备抗血清, 以Western blot鉴定抗体的特异性并检测抗体的效价.结果: 大肠杆菌中表达的A19蛋白占菌体总蛋白的30.2%.Western blot分析显示, 抗血清具有较高的特异性, 其效价约为1: 4 000.结论: 成功地获得了候选的人Era结合蛋白A19, 制备了兔抗A19抗血清, 为后续Era功能的研究奠定了基础.
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