【摘 要】
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目的 构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的基因工程乳杆菌,并对其进行初步的安全性评估.方法 采用高保真PCR从H.pylori标准菌株NCTC 116
【机 构】
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重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室、重庆市重点实验室,重庆医科大学病原生物学教研室,重庆,400016
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目的 构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的基因工程乳杆菌,并对其进行初步的安全性评估.方法 采用高保真PCR从H.pylori标准菌株NCTC 11637中扩增ureB基因,插入乳酸菌表达质粒pMG36e,将重组质粒电转入保加利亚乳杆菌L6032中,获得表达ureB的基因工程乳杆菌.在含乳糖的MRS培养基诱导目的 蛋白表达,Western blot鉴定其免疫原性.连续传代培养60代,检测基因工程乳杆菌的稳定性、形态学与生理生化特性以进行初步的安全性评估.结果 特异PCR、酶切和测序鉴定均证实ureB基因克隆入表达载体pMG36e,SDS-PAGE结果显示,重组质粒pMG36e-ureB电转入保加利亚乳杆菌所构建的基因工程乳杆菌能表达约64KD的蛋白,Western blot证明该蛋白能与抗H.pylori ureB的兔血清反应.稳定性、形态学与生理生化特性检测结果表明,基因工程乳杆菌与原始菌株保加利亚乳杆菌完全一致.结论 成功构建能表达H.pylo-ri UreB的保加利亚乳杆菌L6032-UreB,该基因工程菌在形态与生理生化特性上未发生任何变异,从而为探索幽门螺杆菌感染的益生菌制剂调理疗法奠定了坚实的基础.
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