杂交(单-单杂交)是食用菌种质创新行之有效的方法,而单核菌株与双核菌株的真实性鉴定为其中最重要的环节.黑木耳为我国第二大食用菌,不但与其他常见食用菌亲缘关系较远,而且菌丝细弱、半透明、锁状联合数量少,无法凭借锁状联合的有无来准确鉴定单核菌丝和双核菌丝的真实性.根据多年对黑木耳遗传育种研究实践,集成创新出黑木耳种质杂交创新的流程与关键技术:确定种质创新目标→选择目标性状互补亲本→子实体培养→单孢分离→双重荧光染色鉴定“单核菌株”真实性→选择生长势强的单核菌株进行单-单杂交制备“杂交菌株”→“杂交菌株”真实性鉴定→选择与双亲生理特性差异大的杂交菌株→选择与双亲生化特性差异大的杂交菌株→出耳培养→初筛、复筛出农艺性状表现超亲的特异种质.旨在为同行开展相关研究提供参考.