【摘 要】
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将莱克多巴胺(RAC)与戊二酸酐反应,用混合酸酐法使反应产物与牛血清白蛋白(BSA)偶联生成免疫原,并采用淋巴细胞杂交瘤技术制备RAC单克隆抗体,建立检测猪尿、猪肉中莱克多巴胺
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所/农业部寄生虫学重点开放实验室; 上海出入境检验检疫局;
【基金项目】
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中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2010JB06)
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将莱克多巴胺(RAC)与戊二酸酐反应,用混合酸酐法使反应产物与牛血清白蛋白(BSA)偶联生成免疫原,并采用淋巴细胞杂交瘤技术制备RAC单克隆抗体,建立检测猪尿、猪肉中莱克多巴胺化学发光间接竞争免疫分析法。结果显示:飞行质谱法测得RAC-戊二酸单酯分子量为416.2,RAC-戊二酸单酯与BSA偶联比为3.4∶1;RAC单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶8×104,包被抗原最佳质量浓度为0.5μg/mL;标准曲线呈线性,回归方程为Y=-0.188 2x+0.392 2,R2=0.993 4,IC50值为0.267 ng/mL;与RAC类似化合物及其他药品无明显的交叉反应。尿样回收率为76.8%～90.8%,批内变异系数为6.8%～11.5%,批间变异系数为7.2%～13.8%;猪肉样回收率为75.2%～87.4%,批内变异系数为7.1%～11.6%,批间变异系数为8.6%～14.1%。结果表明:用RAC-戊二酸单脂与BSA偶联物作免疫原成功地研制了针对RAC的特异性抗体,以单抗为基础建立了检测猪尿、猪肉中莱克多巴胺化学发光间接竞争免疫分析法,为进一步研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。
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