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目的
构建稳定过表达hB7-H3基因的人胰腺癌PANC1细胞株，为研究hB7-H3基因的功能提供基础工具。
方法将hB7-H3基因片段插入携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒质粒GV287，构建重组hB7-H3-GV287质粒，转染293T细胞，荧光显微镜下观察GFP的表达，蛋白质印迹法检测hB7-H3蛋白表达；通过慢病毒包装后测定病毒滴度。将表达hB7-H3的病毒感染人胰腺癌PANC1细胞，应用流式细胞仪检测GFP及hB7-H3阳性表达率；实时PCR及蛋白质印迹法检测感染细胞的hB7-H3 mRNA及蛋白表达。以自身环化的GV287质粒作为阴性对照(NC)。
结果重组质粒的PCR扩增片段约1 368 bp，NC质粒无扩增产物，重组质粒DNA测序结果与设计的片段完全一致，表明重组hB7-H3-GV287质粒构建成功。重组质粒转染后293T细胞表达hB7-H3蛋白，而NC质粒转染后细胞无hB7-H3蛋白表达。重组hB7-H3质粒经慢病毒包装后的病毒滴度为2×108 TU/ml。慢病毒感染人胰腺癌PANC1细胞后，细胞hB7-H3阳性表达率、hB7-H3 mRNA及蛋白表达分别为94.3%、5.09±0.24、2.85±0.27，较NC慢病毒感染的18.5%、1.28±0.53、0.44±0.69显著增加，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。
结论稳定过表达hB7-H3基因的人胰腺癌PANC1细胞株的构建成功。