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doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.05.251
冷冻切片是借助在低温的条件下，使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法。冷冻切片技术距今已近有100多年的历史，主要在外科手术中确定病变性质，了解肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织，有无区域淋巴结转移等及手术切缘有无肿瘤组织残留。因此，制作一套高质量的冷冻切片对于确保病理诊断的科学性、可靠性是极其重要的。如今，绝大多数的医院都有国产或国外的冷冻切片机，冷冻切片已经成为病理科的日常工作，成为病理科不可缺少的一部分。
资料与方法
一般资料：2004年4月～2010年12月将我院手术中的各种送检活体组织标本，使用仪器德国莱卡-3050s型冷冻切片机制作病理冷冻切片。
方法：冷冻温度一般在-21～-25℃之间，使用OCT包埋剂。细小组织全部取材，大组织的取材大小为1cm×1cm×0.5cm，在包埋冻头上加少量冷冻包埋剂，在包埋剂未完全冻结之前放上组织，然后在示组织大小加适量包埋剂。冻好的组织先粗刨修，暴露组织最大切片后再进行切片。冷冻切片厚度以5～8μm为宜，将组织切片展平贴于载玻片上。冷冻切片在95%酒精内固定1～2分钟，自来水充分浸洗，哈瑞士苏木素染色1～2分钟，水洗，1%盐酸酒精分化3～10秒，水洗，0.1%氨水蓝化3～5秒，水洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。
注意事项
手术送检的标本要新鲜、干燥、完整，未进行过固定。太小组织如肝穿、肾穿等组织可以放在用生理盐水浸湿的纱布上。取材时在不影响病理诊断的前提下，标本取材尽量小一点，组织厚度不＜3mm，这样有利于组织的快速冻结。应尽量避开坏死及有钙化的区域，对于乳腺组织及淋巴结的取材，应尽量将多余脂肪剔除。含骨的组织不建议做冷冻切片。要剔除手术中残留的线头、细小铁丝、钢钉等杂物。
用干净的滤纸充分吸干组织中多余的水分，能有效的减少冰晶的产生。冷冻组织含游离水分过多，组织未吸干水分就直接包埋，切片中冰晶形成的区域无细胞组织结构，呈结晶样或不规则空隙，周围组织因为冰晶影响，组织结构不同程度破坏，细胞收缩，细胞核明显变小，不利于诊断。
细小组织為便于切片需将其体积增大，可以OTC包埋剂支撑其底部(起垫高组织的作用)，待其凝固后修平，然后将微细组织的待切面朝上放入垫高的OTC包埋剂中，再涂上适量包埋剂。
软脆的组织如甲状腺、脑组织、肝组织及一些质地脆软的肿瘤，切片温度-15～-18℃为宜，温度过低且冷冻时间过久会使组织变硬变脆，切片易出现裂隙。
含脂肪量较多的组织，因其组织较弱软，内含脂肪空泡，冷冻温度必须要低，切片温度应＜-25℃为宜。并且冷冻时间要适当延长。待脂肪组织完全冻硬后即可切出完整切片。切片时进刀要快，否则切片粘连。
质地较硬的组织，如子宫肌瘤、子宫颈组织、部分质地较硬的肿瘤等组织，以肉眼待冷冻组织中央反光区尚存光泽时为最佳切片时机。由于组织结构较致密，组织易冷冻过度，组织切片容易出现搓板状或梯田状厚薄不均现象，因此必须注意观察，发现组织与冷冻托接触面冻硬，且组织表面尚有少许光泽时即开始修块。如果冷冻过硬，可以用手贴组织面上，使组织回温再切片。切片时将肌组织上下对角放置，可减少切片的阻力，易切成平整的薄片。
切片刀要保持预冷状态，不然会和冷冻组织产生温差，聚集的热量会使切片皱缩，不易完整。切片刀和持刀架上的板块应保持干净，如不干净会导致切片污染、撕裂、切片不完整。切片刀要锋利，切片时手摇轮用力均匀、柔和，速度不宜过快、过慢。要先粗削直到暴露最大面，然后切片。贴附切片时，动作要轻巧，用力均匀，并且载玻片与切下来的组织粘帖时速度要快，否则长时间会有皱褶。
固定剂及染液、脱水液应经常更换，保持新鲜。切片固定不充分，蛋白质固定不良会导致蛋白质与核酸在染色过程中溶解。结果切片组织结构与细胞形态模糊，细胞边界不清晰，切片在显微镜下观察发白，影响诊断结果。
讨 论
冷冻切片制作是一个精细的过程，不同组织有不同的冷冻温度，这样才能在最短的时间内完成固定，才能够进行快速切片和染色，这就对病理技术工作提出以下几点要求：①熟悉冷冻切片机的操作方法，掌握机器的各种部件的功能和性能；制片过程操作规范化，注意切片后立即固定切片；切片须经梯度酒精脱水二甲苯透明，不能将切片吹干或烤干后封片；勤于更换固定液及染液，以保证试剂质量稳定。②不断加强组织学、化学、病理学的等基础理论学习能在理论指导下不断进行试剂的改良。③对恒温冷冻切片机进行合理科学的维护使其随时处于良好的工作状态。
冷冻切片是借助在低温的条件下，使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法。冷冻切片技术距今已近有100多年的历史，主要在外科手术中确定病变性质，了解肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织，有无区域淋巴结转移等及手术切缘有无肿瘤组织残留。因此，制作一套高质量的冷冻切片对于确保病理诊断的科学性、可靠性是极其重要的。如今，绝大多数的医院都有国产或国外的冷冻切片机，冷冻切片已经成为病理科的日常工作，成为病理科不可缺少的一部分。
资料与方法
一般资料：2004年4月～2010年12月将我院手术中的各种送检活体组织标本，使用仪器德国莱卡-3050s型冷冻切片机制作病理冷冻切片。
方法：冷冻温度一般在-21～-25℃之间，使用OCT包埋剂。细小组织全部取材，大组织的取材大小为1cm×1cm×0.5cm，在包埋冻头上加少量冷冻包埋剂，在包埋剂未完全冻结之前放上组织，然后在示组织大小加适量包埋剂。冻好的组织先粗刨修，暴露组织最大切片后再进行切片。冷冻切片厚度以5～8μm为宜，将组织切片展平贴于载玻片上。冷冻切片在95%酒精内固定1～2分钟，自来水充分浸洗，哈瑞士苏木素染色1～2分钟，水洗，1%盐酸酒精分化3～10秒，水洗，0.1%氨水蓝化3～5秒，水洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。
注意事项
手术送检的标本要新鲜、干燥、完整，未进行过固定。太小组织如肝穿、肾穿等组织可以放在用生理盐水浸湿的纱布上。取材时在不影响病理诊断的前提下，标本取材尽量小一点，组织厚度不＜3mm，这样有利于组织的快速冻结。应尽量避开坏死及有钙化的区域，对于乳腺组织及淋巴结的取材，应尽量将多余脂肪剔除。含骨的组织不建议做冷冻切片。要剔除手术中残留的线头、细小铁丝、钢钉等杂物。
用干净的滤纸充分吸干组织中多余的水分，能有效的减少冰晶的产生。冷冻组织含游离水分过多，组织未吸干水分就直接包埋，切片中冰晶形成的区域无细胞组织结构，呈结晶样或不规则空隙，周围组织因为冰晶影响，组织结构不同程度破坏，细胞收缩，细胞核明显变小，不利于诊断。
细小组织為便于切片需将其体积增大，可以OTC包埋剂支撑其底部(起垫高组织的作用)，待其凝固后修平，然后将微细组织的待切面朝上放入垫高的OTC包埋剂中，再涂上适量包埋剂。
软脆的组织如甲状腺、脑组织、肝组织及一些质地脆软的肿瘤，切片温度-15～-18℃为宜，温度过低且冷冻时间过久会使组织变硬变脆，切片易出现裂隙。
含脂肪量较多的组织，因其组织较弱软，内含脂肪空泡，冷冻温度必须要低，切片温度应＜-25℃为宜。并且冷冻时间要适当延长。待脂肪组织完全冻硬后即可切出完整切片。切片时进刀要快，否则切片粘连。
质地较硬的组织，如子宫肌瘤、子宫颈组织、部分质地较硬的肿瘤等组织，以肉眼待冷冻组织中央反光区尚存光泽时为最佳切片时机。由于组织结构较致密，组织易冷冻过度，组织切片容易出现搓板状或梯田状厚薄不均现象，因此必须注意观察，发现组织与冷冻托接触面冻硬，且组织表面尚有少许光泽时即开始修块。如果冷冻过硬，可以用手贴组织面上，使组织回温再切片。切片时将肌组织上下对角放置，可减少切片的阻力，易切成平整的薄片。
切片刀要保持预冷状态，不然会和冷冻组织产生温差，聚集的热量会使切片皱缩，不易完整。切片刀和持刀架上的板块应保持干净，如不干净会导致切片污染、撕裂、切片不完整。切片刀要锋利，切片时手摇轮用力均匀、柔和，速度不宜过快、过慢。要先粗削直到暴露最大面，然后切片。贴附切片时，动作要轻巧，用力均匀，并且载玻片与切下来的组织粘帖时速度要快，否则长时间会有皱褶。
固定剂及染液、脱水液应经常更换，保持新鲜。切片固定不充分，蛋白质固定不良会导致蛋白质与核酸在染色过程中溶解。结果切片组织结构与细胞形态模糊，细胞边界不清晰，切片在显微镜下观察发白，影响诊断结果。
讨 论
冷冻切片制作是一个精细的过程，不同组织有不同的冷冻温度，这样才能在最短的时间内完成固定，才能够进行快速切片和染色，这就对病理技术工作提出以下几点要求：①熟悉冷冻切片机的操作方法，掌握机器的各种部件的功能和性能；制片过程操作规范化，注意切片后立即固定切片；切片须经梯度酒精脱水二甲苯透明，不能将切片吹干或烤干后封片；勤于更换固定液及染液，以保证试剂质量稳定。②不断加强组织学、化学、病理学的等基础理论学习能在理论指导下不断进行试剂的改良。③对恒温冷冻切片机进行合理科学的维护使其随时处于良好的工作状态。