论文部分内容阅读
【摘要】目的探讨本地区PCR检测HBV-DNA与乙型肝炎病毒血清标志物(两对半)和谷丙转氨酶检测的相关性。方法 用ELISA方法检测HBV感染者乙肝免疫学检测，用PCR方法检测HBV-DNA,并对结果进行分析。结果大三阳组标本,HBV-DNA阳性率达到97.7％,与文献报道有些出入［1］；小三阳组标本，HBV-DNA阳性率为69.4％,与文献报道基本一致［2］；HBsAg(+)、HBeAg (+)组标本，HBV-DNA阳性率为90.6％；HBsAg(+)、HBcAb (+)组标本，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为71.4％;HBsAg(-)、HBeAg (-),HBV-DNA阳性率为4.5％，与文献报道基本一致［3］。HBV-DNA阳性患者中，转氨酶异常者占65.5％ ，HBV-DNA阴性患者中，谷丙转氨酶异常者占26.1％。结论HBV-DNA荧光定量PCR检测在临床上对乙型肝炎基因诊断,特别是进行抗病毒治疗和治疗监测方面均优于HBV血清学标志物。
1材料与方法
1.1标本来源 ：1对象是2009年9月至12月来我院就诊的乙肝患者，年龄从12岁到60岁不等。
1.2方法 仪器 法国产ABI ;朗道酶标仪、洗板机；济南金浩峰有限司生产的生化分析仪。试剂是深圳匹基生物工程有限公司生产的乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增 （PCR）荧光定量检测试剂盒；上海荣盛乙肝五项试剂盒（ELISA）;中生北控生产的谷丙转氨酶试剂盒。
2结果
表1荧光定量HBV-DNA与血清标志物结果比对
其中116例HBV-DNA阳性患者中，转氨酶异常者有76人份，阳性率为65.5％ ，23人HBV-DNA阴性患者中，谷丙转氨酶异常者6人，阳性率为26.1％。
3讨论
一般来说，能引起乙肝病毒（HBV ）感染的病毒量极微，据报道接种0.04UL的感染血液就足以导致传染。这样微量病毒进入体内，早期是ELISA 检测不出（检测法灵敏度为0.1ng） 。核酸扩增 （PCR）荧光定量检测法的使用，可以将病毒的某段特异性基因扩增数百万倍，因此可以将少到几个病毒的样本检出。常规工作检测乙型肝炎患者血清标志物有大三阳,小三阳和HBsAg、HbeAb阳性，HbsAg、HbcAb阳性四种情况最常见，从以上结果可以发现大三阳和HBsAg、HbeAb阳性患者体内HBV-DNA载量较高切阳性率也高，两者具有显著的相关性，反映病毒复制活跃，传染性强，应引起医生和患者的高度重视。小三阳的阳性率为69.4％，PCR定量拷贝数为(4.425±1.70)×105反映一部分患者病毒复制趋于停止，传染性弱，而HBV-DNA＞1.0×103copy/ml有可能为前C区和BcP区的变异，前C区最常见的变异为G1896A点突变，形成终止密码子（TAG），不表达HBeAg，BcP区最常见的变异是A1762T/G1764A联合点突变，选择性地抑制了前CMRNA的转录，降低了HBeAg合成[4]。而HBsAg阴性和HBeAg阴性的标本，即便PCR结果阳性，但其拷贝数也是很低，其原因可能为S基因发生变异可导致隐匿性HBV感染表现为血清HBsAg阴性，但仍有HBV低水平复制（血清HBV-DNA常＜1.0×104copy/ml［5］，或者患者处于乙肝病毒感染窗口期，ELISA法检测不。本文同时发现有1例大三陽患者，其血清PCR为阴性，这种情况应考虑是否HBV基因的S区发生有意义的点突变或插入、缺失突变［6］，而导致PCR结果为阴性。综上所述，大部分乙肝患者定量PCR检测HBV-DNA的结果与HBV血清学标志物检测结果一致，尤其HbsAg和HbeAg阳性与HBV-DNA复制密切相关 ，但由于受到HBV基因包括S区、前C区等部X发生变异的影响 ，可引起HBV呈低水平复制，血清中HBsAg未能被检出或HBsAb不能有效清除血清中的HBV,血清中HBV-DNA载量处于很低水平等，造成少数患者两种检测结果的不一致。本文检测结果表明，定量PCR检测HBV-DNA在判断体内HBV是否在复制、复制的程度、HBV是否被清除，以及在临床上对乙型肝炎基因诊断,特别是进行抗病毒治疗和治疗监测方面具有重要意义，均优于HBV血清学标志物的检测，值得临床应用。而从以上结果也验证了平时所说的大三阳传染性强，小三阳传染性弱是正确的，而谷丙转氨酶不高就不用治疗的说法确有待磋商。
参考文献
［1］赖宏芳，付晓野，董玉琳，等.荧光探针定量PCR检测HBVDNA［J］.上海：上海医学检验学杂志，2000，15(1)：18~19.
［2］周美霞，张钧，王田春.乙肝病毒DNA、前S1抗原及e抗原在慢性乙肝中的临床意义［J］.临床荟萃，2004，24(19)：1394~1396.
［3］鲁军 荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义［J］中国医药导报，2008，5（33）78
［4］ScaglioniPP.MelegariM,wands JR.BiologicproperitiesofhepatitisBviral genomes with mutations in the precore promoter and precore open reading frame[J],Virology ,1997,233:374~381.
［5］HuKQ. Occult hepatitis B virus infection and its clinical implications[J]J Viral Hepat,2002,9:243~257
［6］何印蕾.乙肝患者血清前S1抗原检测及其临床价值［J］.右江医学，2005，33(2)：154~155
1材料与方法
1.1标本来源 ：1对象是2009年9月至12月来我院就诊的乙肝患者，年龄从12岁到60岁不等。
1.2方法 仪器 法国产ABI ;朗道酶标仪、洗板机；济南金浩峰有限司生产的生化分析仪。试剂是深圳匹基生物工程有限公司生产的乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增 （PCR）荧光定量检测试剂盒；上海荣盛乙肝五项试剂盒（ELISA）;中生北控生产的谷丙转氨酶试剂盒。
2结果
表1荧光定量HBV-DNA与血清标志物结果比对
其中116例HBV-DNA阳性患者中，转氨酶异常者有76人份，阳性率为65.5％ ，23人HBV-DNA阴性患者中，谷丙转氨酶异常者6人，阳性率为26.1％。
3讨论
一般来说，能引起乙肝病毒（HBV ）感染的病毒量极微，据报道接种0.04UL的感染血液就足以导致传染。这样微量病毒进入体内，早期是ELISA 检测不出（检测法灵敏度为0.1ng） 。核酸扩增 （PCR）荧光定量检测法的使用，可以将病毒的某段特异性基因扩增数百万倍，因此可以将少到几个病毒的样本检出。常规工作检测乙型肝炎患者血清标志物有大三阳,小三阳和HBsAg、HbeAb阳性，HbsAg、HbcAb阳性四种情况最常见，从以上结果可以发现大三阳和HBsAg、HbeAb阳性患者体内HBV-DNA载量较高切阳性率也高，两者具有显著的相关性，反映病毒复制活跃，传染性强，应引起医生和患者的高度重视。小三阳的阳性率为69.4％，PCR定量拷贝数为(4.425±1.70)×105反映一部分患者病毒复制趋于停止，传染性弱，而HBV-DNA＞1.0×103copy/ml有可能为前C区和BcP区的变异，前C区最常见的变异为G1896A点突变，形成终止密码子（TAG），不表达HBeAg，BcP区最常见的变异是A1762T/G1764A联合点突变，选择性地抑制了前CMRNA的转录，降低了HBeAg合成[4]。而HBsAg阴性和HBeAg阴性的标本，即便PCR结果阳性，但其拷贝数也是很低，其原因可能为S基因发生变异可导致隐匿性HBV感染表现为血清HBsAg阴性，但仍有HBV低水平复制（血清HBV-DNA常＜1.0×104copy/ml［5］，或者患者处于乙肝病毒感染窗口期，ELISA法检测不。本文同时发现有1例大三陽患者，其血清PCR为阴性，这种情况应考虑是否HBV基因的S区发生有意义的点突变或插入、缺失突变［6］，而导致PCR结果为阴性。综上所述，大部分乙肝患者定量PCR检测HBV-DNA的结果与HBV血清学标志物检测结果一致，尤其HbsAg和HbeAg阳性与HBV-DNA复制密切相关 ，但由于受到HBV基因包括S区、前C区等部X发生变异的影响 ，可引起HBV呈低水平复制，血清中HBsAg未能被检出或HBsAb不能有效清除血清中的HBV,血清中HBV-DNA载量处于很低水平等，造成少数患者两种检测结果的不一致。本文检测结果表明，定量PCR检测HBV-DNA在判断体内HBV是否在复制、复制的程度、HBV是否被清除，以及在临床上对乙型肝炎基因诊断,特别是进行抗病毒治疗和治疗监测方面具有重要意义，均优于HBV血清学标志物的检测，值得临床应用。而从以上结果也验证了平时所说的大三阳传染性强，小三阳传染性弱是正确的，而谷丙转氨酶不高就不用治疗的说法确有待磋商。
参考文献
［1］赖宏芳，付晓野，董玉琳，等.荧光探针定量PCR检测HBVDNA［J］.上海：上海医学检验学杂志，2000，15(1)：18~19.
［2］周美霞，张钧，王田春.乙肝病毒DNA、前S1抗原及e抗原在慢性乙肝中的临床意义［J］.临床荟萃，2004，24(19)：1394~1396.
［3］鲁军 荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义［J］中国医药导报，2008，5（33）78
［4］ScaglioniPP.MelegariM,wands JR.BiologicproperitiesofhepatitisBviral genomes with mutations in the precore promoter and precore open reading frame[J],Virology ,1997,233:374~381.
［5］HuKQ. Occult hepatitis B virus infection and its clinical implications[J]J Viral Hepat,2002,9:243~257
［6］何印蕾.乙肝患者血清前S1抗原检测及其临床价值［J］.右江医学，2005，33(2)：154~155