【摘 要】
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目的:探讨天然反义转录本Tetraspanin31调控CDK4的分子机制.方法:针对TSPAN31设计合成靶向干扰的siRNA,转染肝癌细胞,qRT-PCR和免疫印迹检测肝癌细胞实验组与对照组细胞CDK4
【机 构】
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广州医科大学生物化学与分子生物学教研室,广东 广州,511436;广州医科大学临床医学系,广东 广州,511436;
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目的:探讨天然反义转录本Tetraspanin31调控CDK4的分子机制.方法:针对TSPAN31设计合成靶向干扰的siRNA,转染肝癌细胞,qRT-PCR和免疫印迹检测肝癌细胞实验组与对照组细胞CDK4的转录和翻译水平,免疫印迹检测细胞周期蛋白Cyclin D1、转录因子E2F1蛋白表达水平;在HEK293T细胞、Hela细胞中转染过表达TSPAN31全长、编码区及3末端非翻译区质粒,qRT-PCR及免疫印迹检测CDK4基因转录和翻译水平.结果:与对照组相比,肝癌细胞siRNA干扰后TSPAN31蛋白相对表达量显著降低,CDK4相对表达量显著升高,Cyclin D1、E2F1蛋白相对表达量升高(均P<0.05).与对照组相比,HEK293T细胞、Hela细胞转染过表达TSPAN313末端非翻译区质粒组及过表达TSPAN31全长质粒组CDK4转录及翻译的相对表达水平显著降低(均P<0.05),而转染过表达TSPAN31编码区质粒组没有显著差异(均P>0.05).结论:TSPAN31可在肝癌细胞中调控信号通路蛋白Cyclin D1、CDK4及E2F1蛋白表达,TSPAN31对CDK4的调控作用可能主要是通过转录产物的3末端非翻译区进行的.
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