【摘 要】
：
旨在对制备的甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactide-co-glycolide),PLGA]纳米微球作为口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FM DV)核酸疫苗递送载体进行评价.采用西佛碱反应和元素分析制备具有一定取代度的甘露糖修饰的壳聚糖衍生物(mannose modified chitosan,MCS),然后,经双重乳化挥发法制备得到甘露糖修饰的壳聚糖PLGA纳米微球(MCS-PLGA-NPs).采用纳米粒径仪检测MCS-PLGA-N
【机 构】
：
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/中国国家口蹄疫参考实验室,兰州730064
论文部分内容阅读
旨在对制备的甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactide-co-glycolide),PLGA]纳米微球作为口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FM DV)核酸疫苗递送载体进行评价.采用西佛碱反应和元素分析制备具有一定取代度的甘露糖修饰的壳聚糖衍生物(mannose modified chitosan,MCS),然后,经双重乳化挥发法制备得到甘露糖修饰的壳聚糖PLGA纳米微球(MCS-PLGA-NPs).采用纳米粒径仪检测MCS-PLGA-NPs粒径分布和表面电势(zeta)、扫描电镜考察其形态、琼脂糖凝胶电泳观察其对质粒的吸附和吸附质粒后抵抗核酸酶降解能力、CCK-8法检测MCS-PLGA-NPs的细胞毒性、激光共聚焦观察巨噬细胞对MCS-PLGA-NPs-质粒DNA复合物的摄取、荧光显微镜和Western blot验证MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA在细胞中的表达.元素分析结果表明,成功制备了取代度为5％～10％的MCS.纳米粒径测定和扫描电镜结果表明,MCS-PLGA-NPs的zeta为正值、粒径分布均匀且形态规则呈球形.琼脂糖凝胶电泳结果显示,MCS-PLGA-NPs吸附质粒的能力随着其质量的增加而增强并且可以在一定程度上抵抗核酸酶降解质粒DNA.在细胞毒性试验中,不同浓度的MCS-PLGA-NPs与RAW264.7细胞共孵育24 h后,细胞存活率仍在85％以上.在细胞摄取试验中,用激光共聚焦显微镜可以明显观察到质粒DNA结合到纳米微球表面被RAW264.7细胞摄取.荧光显微镜和Western blot试验证明MCS-PL-GA-NPs加载质粒DNA可以在细胞中进行表达.综上表明,本研究成功制备了MCS以及具有递送核酸疫苗能力的MCS-PLGA-NPs,为FMDV核酸疫苗的递送研究提供了新的方向和见解,也为该递送载体携带特定抗原靶向抗原递呈细胞表面甘露糖受体以及应用于动物免疫的研究奠定基础.
其他文献
为实现田间条件下水稻稻瘟病、纹枯病、白叶枯病3种常见水稻叶部病害的快速识别和诊断,提出了一种基于交换粒子群优化算法(SPSO)和支持向量机(SVM)的水稻病害诊断方法.首先在田间采集300幅水稻叶部病害图像,利用中值滤波方法和方向梯度直方图,得到3种病害3780维特征向量;然后建立病害识别支持向量机模型,使用交换粒子群优化算法(SPSO)优化支持向量机径向基函数(RBF)的参数γ和惩罚因子c.结果表明:该方法优于单独使用支持向量机或粒子群(PSO)算法优化的支持向量机模型,3种水稻叶部病害平均识别准确率达
哺乳动物精子经过附睾成熟后才能获得运动及受精的能力,为解释水牛精子在附睾中的成熟过程,本研究选用性成熟期的沼泽型水牛附睾,利用乙烯吡咯烷酮包裹的硅胶微小颗粒(Percoll)梯度离心纯化分别提取附睾头、体和尾部精子,应用计算机辅助精子分析系统(CASA)检测精子活力,透射电镜观察附睾不同部位精子的超微结构,对精子进行荧光标记后,利用流式细胞仪和荧光显微镜观察检测不同部位精子质膜完整率、线粒体鞘膜电位和顶体差异.结果 表明,Percoll分离得到附睾头、体和尾3部位精子的纯度达95％,不同部位精子活力分别为
旨在研究绒山羊毛囊生长期饲喂催乳素(PRL)抑制剂对毛囊发育的影响.本研究选择3月龄体重相近(《23.01±4.82) kg)、健康良好的燕山绒山羊公羊20只,随机分为两组,每组10只,分别为对照组和试验组,试验组饲喂PRL抑制剂(0.06 mg·kg-1),试验期90 d.试验结束时采集羊绒纤维、血液和皮肤样品,分析饲喂PRL抑制剂对山羊绒长度、细度、血液指标、毛囊性状及皮肤组织PRL、MTNR1a和RORα mRNA表达水平的影响.结果 表明,饲喂PRL抑制剂显著提高了绒山羊初级毛囊数量、次级毛囊数量
为了深入探究HSP27基因在藏羊卵泡发育过程中的作用,本研究选择健康的(3～4岁)经产藏母羊6只,屠宰获得卵巢组织进行藏羊HSP27基因克隆,利用生物信息学方法分析HSP27基因CDS区序列,构建HSP27基因过表达及沉默载体,分离培养藏羊卵巢颗粒细胞,将构建的载体按不同分组进行细胞转染试验即空白组、过表达载体组、沉默载体组、阴性对照组,每组设3个复孔.显微镜观察各转染组培养0、24、48、72 h的细胞形态变化及细胞计数,RT-PCR检测各转染组HSP27、GDF9、BMPR-1B、Erβ基因mRNA表
旨在揭示miR-200b在绵羊卵泡颗粒细胞的作用.本研究利用在线工具(TargetScan、miRTarBase及miRDB)预测miR-200b的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析.将分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞分为4组,分别转染miR-200b mimic、mimic NC、miR-200b inhibitor和inhibitor NC,每组6个重复.采用CCK8法分别检测转染24、48和72 h颗粒细胞的存活率;采用荧光定量PCR检测miR-200b、CDK4、CDK6、CC-
本研究旨在探究性成熟期辽宁绒山羊与子午岭黑山羊睾丸发育是否存在差异,并对两品种繁殖性能进行比较.选取性成熟期健康的辽宁绒山羊和子午岭黑山羊各5只,采集睾丸组织,通过大体解剖和苏木精-伊红(HE)染色石蜡切片,比较两品种山羊睾丸组织发育及形态学差异;ELISA检测雄激素浓度;实时荧光定量PCR (real time quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)检测两品种山羊睾丸组织中死盒多肽4(DEAD box polypeptide 4,DDX4)和类无精症
本试验旨在研究饲粮中添加不同比例全株青贮玉米对仔鹅生长性能、屠宰性能、肉品质及血清生化指标的影响,为全株青贮玉米在肉鹅养殖上的应用提供依据.试验选取健康、平均体重为982～985 g的28日龄三花鹅280只,随机分为4组,每组7个重复,每个重复10只仔鹅.对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂添加8％、16％、24％全株青贮玉米的试验饲粮,试验期为42 d.记录28、42、56、70日龄时鹅的体重(BW)和耗料量,计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G);70日龄时,每个重复选择2
旨在研究视神经蛋白(neuropsin,OPN5)对鸭颗粒细胞凋亡、增殖及类固醇激素生成的影响.本研究分别对鸭颗粒细胞进行OPN5过表达质粒和OPN5 siRNA处理72 h(n=6),应用EdU细胞增殖检测技术、流式细胞技术、Annexin V-FITC、RT-PCR、Western blot及ELISA技术系统地检测颗粒细胞的增殖、凋亡情况及生殖相关基因的mRNA、蛋白水平及激素水平的变化规律.结果 显示,OPN5过表达能促进鸭卵泡颗粒细胞增殖,抑制鸭卵泡颗粒细胞凋亡;能极显著地促进GnRHR、FSH
旨在探索粪便样本分析对犬科动物物种鉴别的方法及其可行性,同时对野外犬科动物棘球绦虫感染情况进行调查.采用哺乳动物线粒体DNA控制区通用引物对101份采集自野外环境的犬科动物粪便DNA进行PCR扩增和测序,通过核苷酸位点变异分析、BLAST相似性比对、遗传距离分析和系统进化树构建,对粪样来源物种进行分子鉴别.同时,采用粪-抗原ELISA检测,对粪样棘球绦虫感染情况进行调查.结果 表明:粪样来源物种鉴别的检测成功率为73.27％,获得的74条序列共定义单倍型20个,所有单倍型序列均可在GenBank数据库中匹
旨在探究终末宿主肝环状RNA (circRNAs)在犬弓首蛔虫诱导致病过程中的潜在调控作用.18只6～7周龄的比格犬被平均分为3组(感染后0.5d组、感染后1d组和感染后36 d组),每组包括感染和对照各3只,分别于感染后对应的时间点收集肝样品.提取感染和对照组肝的总RNA,利用高通量RNA测序,构建circRNA文库,对差异表达的circRNAs进行分析,并对差异表达circRNAs的亲本基因进行GO注释和KEGG富集分析.随机选取9个差异表达circRNAs进行实时荧光定量PCR验证.结果 显示,与对