【摘 要】
：
本研究将microRNA插入EF1α启动子的内含子中,构建携带沉默PD-1基因的miRNA的新型慢病毒载体,并将其应用于CAR-T细胞.通过流式细胞术检测慢病毒载体转导效率和PD-1沉默效率;W
【机 构】
：
温州医科大学检验医学院生命科学学院,浙江温州 325035温州医科大学检验医学院生命科学学院,浙江温州 325035;温州医科大学浙江启新生物技术有限公司,浙江温州 325035;
论文部分内容阅读
本研究将microRNA插入EF1α启动子的内含子中,构建携带沉默PD-1基因的miRNA的新型慢病毒载体,并将其应用于CAR-T细胞.通过流式细胞术检测慢病毒载体转导效率和PD-1沉默效率;Western blotting 检测PD-1蛋白表达差异;荧光定量PCR检测microRNA相对表达情况;荧光素酶生物发光法和流式细胞术检测CAR-T细胞的能力.结果 显示与U6转录microRNA的载体相比较,将microRNA插入到EF1-α内含子中的病毒载体转导效率更显著,对PD-1的敲低效率均达90％以上,且Western blotting结果验证了PD-1的敲低效果.另外通过荧光定量PCR,可显示出转导该新型慢病毒载体的Jurkat细胞内microRNA的相对表达量.荧光素酶生物发光法证实了CAR-T细胞针对靶细胞的特异杀伤性,流式细胞术结果表明沉默PD-1的CAR-T细胞相较于正常CAR-T细胞显示出更强的特异性杀伤能力.本研究成功构建了经microRNA敲低PD-1的新型慢病毒载体并验证了其转导效率的优越性,以及基于此载体表达的microRNA可高效地沉默PD-1;且应用此载体的CAR-T细胞能发挥更强的杀伤活性,从而为后续该CAR-T细胞治疗表达PD-L1的肿瘤奠定基础.
其他文献
本研究旨在探讨嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胁迫下MHCⅠ基因在东北林蛙不同组织的表达特征,为揭示两栖类抗感染免疫应答机制提供依据.文中首先构建嗜水气单胞菌感
为了筛选出免疫原性最佳的基因Ⅰ型乙型脑炎病毒亚单位疫苗候选抗原,将基因Ⅰ型JEV GS株的prMEⅢ融合基因、polytope复合表位基因和prMEⅢ-polytope融合基因分别克隆构建到原
为提高口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的特异性识别和递呈,为靶向疫苗研究奠定基础,利用反向PCR技术,将卵清蛋白(Ova
盐分是影响作物生长最重要的因素,使用能促进植物生长的耐盐碱促生菌减轻盐胁迫引起的损害是一种农业上的有效方法。文中从盐碱地筛选得到7株耐盐细菌,并考察筛选菌株的产胞外聚合物(EPS)能力、降碱能力和产吲哚-3-乙酸(IAA)能力。经综合评价选出1株优势菌株DB01,菌株DB01产EPS能力为0.21 g/g,降碱能力为8.7%,产IAA的能力为8.97 mg/L。菌株经16S rRNA鉴定为海水盐单
细胞色素P450单加氧酶(Cytochrome P450 monooxygenases)是一种广谱催化剂,可以催化多种类型反应而参与生物体外源物质代谢与天然产物的合成.为丰富P450作为合成生物学的酶元
番茄红素作为一种高附加价值的萜类化合物已受到国内外研究者的广泛关注.首先对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae模式菌株S288c和YPH499合成番茄红素的能力进行分析比较,结
在普通试验机上 ,采用 AB-0 4声发射检测系统测定了南屯煤矿 3上 煤层的冲击倾向性 ,研究了煤层与顶板复合试件的冲击倾向指标 ,证明顶板对煤层冲击有一定影响 ,而且顶板厚度
单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是重要的人兽共患李斯特氏菌病的致病菌,疫苗免疫是预防该病原菌感染的有效手段之一.本研究研制了添加矿物油佐剂Montani
应用CRISPR/Cas9技术敲除3T3-L1前脂肪细胞plin1,观察PLIN1缺失对脂肪细胞中脂肪水解的影响并探究可能机制.常规培养3T3-L1前脂肪细胞,电穿孔法转染plin1敲除载体,嘌呤霉素培