以人源A549细胞为研究对象，体外构建百草枯（Paraquat，PQ）细胞模型，探讨血小板反应蛋白（Thrombospondin，TSP）及其受体CD47在PQ致肺纤维化中的作用。
方法体外培养人源A549细胞，实验分为正常组、PQ组、Anti-TSP1组（PQ+终浓度为10 μg/ml的TSP1中和抗体）。采用CCK8法检测不同浓度PQ（50、100、200、400、600、800、1 000 μmol/L）在不同时间（12、24、48 h）对细胞存活率的影响，以细胞半数存活率为标准筛选出作用于后续试验的浓度和时间点；倒置显微镜观察细胞形态变化；采用酶联免疫吸附（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）法测定纤维连接蛋白（Fibronectin，FN）、I型胶原的表达量；免疫细胞化学（Immunocytochemistry，ICC）法观察TSP-1、CD47的蛋白表达情况；免疫荧光双染（Immunofluorescence double staining）观察TSP-1、CD47共表达；实时荧光定量PCR（Real Time PCR，RT-PCR）检测TSP-1、CD47 mRNA的表达量，Western印迹法（Western Blot，WB）检测TSP-1、CD47蛋白表达；流式细胞仪检测细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）水平。
结果PQ作用时间一定时，细胞活性随PQ浓度增加而降低。正常组细胞间连接紧密，呈鹅卵石状，排列整齐，岛状或成团生长；PQ组细胞随着PQ浓度增加，细胞间隙逐渐增大，形态逐渐变得不均一，伸出不规则突起，呈纺锤体形或长梭形。随着PQ作用浓度增加，与正常组比较，PQ组FN、I型胶原的相对表达量逐渐增多，差异有统计学意义（P<0.05），以200 μmol/L时最为明显，差异有统计学意义（P<0.05）。随着PQ作用浓度增加，与正常组比较，PQ组TSP-1、CD47的mRNA水平表达上调、蛋白表达量明显增加，差异有统计学意义（P<0.05），以200 μmol/L时最为明显。免疫荧光显示TSP-1、CD47在细胞质中存在共表达，差异有统计学意义（P<0.05）。与正常组比较，PQ组细胞ROS水平在24 h时明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。与PQ组比较，Anti-TSP1组细胞活性明显增加，差异有统计学意义（P<0.05），形态趋向正常细胞形态变化；TSP-1、CD47的RNA水平及蛋白表达量均有下降，差异有统计学意义（P<0.05）；ROS的过表达受到抑制，差异有统计学意义（P<0.05）；FN、I型胶原的相对表达量减少，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论PQ刺激A549细胞可诱导细胞发生形态学改变，使TSP-1、CD47表达增加、FN、I型胶原的表达量升高、ROS产生增多。TSP-1中和抗体对抗TSP-1后，可部分改善以上变化。TSP-1-CD47可能与氧化应激介导的PQ致肺纤维化过程相关联。