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为获得大量、有活力的原生质体,建立起高效的小青杨(Populus pseudo-simonii Kitag.)原生体分离体系,本研究以小青杨无菌苗叶片为材料进行原生质体分离条件的研究。结果表明:酶的种类和浓度、渗透压稳定剂浓度、酶解时间、叶龄是影响原生质体分离的重要因素;将叶龄35天的无菌苗第2～3片叶片置于酶液组成为CPW+3.0%纤维素酶R-10+0.5%离析酶R-10+0.1%果胶酶Y-23+0.6mol/L甘露醇+0.6g/LMES+1g/LBSA中酶解8h,原生质体产量和活力分别为2.44×107个/g和78.7%。通过该分离体系稳定的获得了高产量、高活力的原生质体,可以满足进一步的原生质体培养等技术的要求。