【摘 要】
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目的建立HEV全长基因组扩增克隆和全长HEV RNA体外瞬时转染细胞方法和初步应用。方法取5例抗HEV IgG阳性患者血清，采用特异性引物逆转录HEV RNA为cDNA，设计通用的分段且相互重
【机 构】
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北京市通州区新华医院消化内科,解放军第302医院肝脏肿瘤诊疗与研究中心
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目的建立HEV全长基因组扩增克隆和全长HEV RNA体外瞬时转染细胞方法和初步应用。方法取5例抗HEV IgG阳性患者血清，采用特异性引物逆转录HEV RNA为cDNA，设计通用的分段且相互重叠的PCR引物分步扩增，然后再分别将PCR产物进行重组PCR扩增，最终获得全长的HEV RNA cDNA产物片段。测序确定其序列，采用T—A克隆全长HEV cDNA序列，将HEV全长cDNA序列进行体外转录，提取转录后产物的RNA（去除DNA模板），获得高水平的HEV RNA产物，采用脉冲电流转染HepG2细胞，转染
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