【摘 要】
：
目的探讨克尔斯滕大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(KRAS)突变亚型对非小细胞肺癌细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)和2(PD-L2)的表达影响。方法纳入2018年1月至2021年1月甘肃省肿瘤医院收治的KRAS阳性非小细胞肺癌患者95例，通过测序检测KRAS基因组序列，通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹检测PD-L1和PD-L2的表达。使用成簇的规则间隔的短回文重复基因编辑(CRIS
【机 构】
：
天津医科大学研究生院 300070,甘肃省肿瘤医院胸外科 730050,甘肃省肿瘤医院胸外科 730050,甘肃省肿瘤医院胸外科 730050,天津市胸科医院胸外科 300222,天津市胸科医院胸外科
论文部分内容阅读
目的探讨克尔斯滕大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(KRAS)突变亚型对非小细胞肺癌细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)和2(PD-L2)的表达影响。
方法纳入2018年1月至2021年1月甘肃省肿瘤医院收治的KRAS阳性非小细胞肺癌患者95例，通过测序检测KRAS基因组序列，通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹检测PD-L1和PD-L2的表达。使用成簇的规则间隔的短回文重复基因编辑(CRISPR/CAS9)技术构建KRAS缺失型A549细胞，在敲除株中过表达KRAS野生型和突变型，检测其对PD-L1和PD-L2的表达影响。将KRAS野生型和突变型过表达的KRAS敲除人肺泡上皮细胞549(A549)细胞株与树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)，通过流式细胞术检测群集行列式蛋白3阳性(CD3+)细胞的凋亡水平。使用t检验比较连续变量。使用Mann-Whitney检验分析KRAS突变型患者PD-L1和PD-L2。Chi-square检验分析非小细胞肺癌患者KRAS突变型和KRAS野生型的临床特征。
结果纳入KRAS阳性非小细胞肺癌患者95例，KRAS野生型31例、KRAS突变型64例；其中KRAS第12位甘氨酸突变为天冬氨酸(G12D)13例、突变为缬氨酸(G12V)12例、突变为半胱氨酸(G12C)25例、突变为丙氨酸(G12A)14例。KRAS突变型患者PD-L1和PD-L2的mRNA表达水平(1.062比1.834，U＝38；1.062比1.668，U＝70；1.062比1.544，U＝111；1.062比1.479，U＝89，P<0.05；1.067比1.798，U＝68；1.067比1.595，U＝86；1.067比1.527，U＝171；1.067比1.680，U＝34，P<0.05)和蛋白表达水平均高于KRAS野生型患者，差异有统计学意义。在KRAS敲除A549细胞株中，相较于KRAS野生型，KRAS突变型更能够促进PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达同时，将KRAS-G12D，KRAS-G12V，KRAS-G12C，KRAS-G12A质粒混合在一起作为RAS野生型(KRAS-MT)与KRAS突变型(KRAS-WT)分别转染KRAS敲除A549细胞株，KRAS-MT依旧可以促进PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达。在KRAS敲除A549细胞株中过表达KRAS-MT与KRAS-WT后，KRAS突变亚型不能激活细胞外信号调节激酶(ERK)通路，但是可以激活丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路。AKT抑制剂处理后，KRAS-MT与KRAS-WT转染KRAS敲除A549细胞株的PD-L1和PD-L2的表达差异无统计学意义。将转染了KRAS-MT或KRAS-WT的KRAS KO A549细胞株与DC-CIK以1∶1的比例共培养，随后检测DC-CIK细胞的凋亡水平，发现KRAS-MT能够显著增加DC-CIK细胞中CD3+细胞亚群的凋亡(F＝12.5，P<0.05)，差异有统计学意义。
结论KRAS突变亚型能够显著增强非小细胞肺癌细胞PD-1配体PD-L1和PD-L2的表达，并且能够促进免疫细胞DC-CIK细胞中CD3+细胞亚群的凋亡。
其他文献
肺癌的发病率及病死率均位居各恶性肿瘤首位，大部分患者确诊时已处于晚期。对高危人群进行CT筛查被认为可以降低肺癌病死率并发现更多早期患者。但是CT的假阳性率高，需要长期随访或有创检查才可确诊。血清肿瘤标志物以其微创、稳定性好等特点，成为肺癌早期诊断研究的热点。肺癌相关抗原被免疫系统捕获后可产生自身抗体，且在肿瘤早期即可大量出现，并稳定存在。因此，检测血清中自身抗体可有效的对肺癌进行早筛、早诊。在此，
目的本文旨在分析探讨合理有效的高校跨学科实体机构运行与管理机制。方法采用案例分析法，研究国外高水平研究型大学建设成熟的跨学科实体研究机构的运行与管理机制，为国内高校跨学科研究机构的良好运行及科学管理提出参考性意见与建议。结果国外高水平研究型大学跨学科实体机构多具有人才组织形式灵活、科研平台共享机制充分以及与产业界密切合作的特点，有效促进了跨学科知识的产生、传播及转化的全过程与良性循环，驱动跨学科实
目的探讨饱和氢气生理盐水对幼鼠高氧所致肺损伤的影响及其分子机制。方法幼年、雄性SD大鼠63只，2周龄，体重30～50 g，将其随机数字表法分为3组：高氧组(HO组，n＝21)，连续7 d吸入高浓度氧气并腹腔注射生理盐水0.5 ml；高氧并饱和氢气生理盐水干预组(HO+HRS组，n＝21)，连续7 d吸入高浓度氧气并腹腔注射饱和氢气生理盐水0.5 ml；空白对照组(C组，n＝21)，连续7 d吸入空
目的探讨Rab10在肝细胞肝癌转移中的作用,为晚期肝癌的治疗提供新靶点。方法利用美国癌症基因组图谱(Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达汇编(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库分析Rab10在肝癌组织和癌旁组织的表达及表达与肝癌患者的生存关系。Western Blot检测HCC-LM3细胞在正常培养条件和转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)刺激下,干涉Rab10后上皮间质转化相关蛋白E-cadhe
目的探讨狐猴酪氨酸激酶-3(LMTK3)蛋白和AT丰富结合域1A(ARID1A)蛋白在甲状腺癌及腺瘤组织中的表达、以及两者与甲状腺癌临床病理特征的关系及意义。方法收集2013年2月至2020年11月临沂市人民医院和临沂市中医医院手术治疗甲状腺肿瘤患者的组织标本109例，其中25例甲状腺瘤组织、84例甲状腺癌组织，另选择18例正常甲状腺组织作为对照组。采用免疫组织化学法检测上述组织中LMTK3和AR
目的探讨糖类抗原199(CA199)和血小板计数(PLT)变化与急性梗阻性化脓性胆管炎(AOSC)的关系。方法选择商丘市第一人民医院2019年1月至2020年5月收入90例AOSC患者，并选择我院同期健康体检者60例进行研究，观察两组入选者不同时期PLT、CA199水平，以及不同AOSC患者PLT、CA199水平，并分析PLT、CA199水平与AOSC患者之间的相关性。结果入院时两组PLT、CA1
目的分析和探讨肺动脉瓣环指数(PAI)在法洛四联症(TOF)患儿环补片(transannular patch，TAP)的应用价值。方法回顾性分析2018年12月至2019年12月首都医科大学附属北京安贞医院小儿心脏中心诊断TOF并行根治术的130例患儿，纳入本研究112例，排除18例。将其分为跨环补片组与非跨环补片组，测量肺动脉瓣环及主动脉瓣环等相关数值，计算每组PAI、肺动脉瓣Z值和主肺动脉Z值
先天性心脏病是最常见的出生缺陷之一，其结构性改变往往需要在其产后进行手术或非手术干预。有学者认为由于早期原发性的宫内心脏异常可能阻碍心脏的正常发育并导致不可逆的继发性结构改变，所以目前将对先天性心脏病的治疗侧重于产前诊断并进行胎儿期干预。自1984年第一次成功施行胎儿手术且随着胎儿心脏超声等诊断技术的发展和进步，将先天性心脏病的治疗提至胎儿期逐渐成为研究重点，本文将从特定类型先心病的胎儿宫内介入治
目的检测B细胞淋巴瘤-XL基因(bcl-XL)在甲状腺癌组织和甲状腺癌细胞系的表达，探讨其是否参与甲状腺癌细胞的凋亡抵抗。方法采用免疫组织化学(IHC)检测2015年9月至2019年9月保存在河南大学第一附属医院的161例甲状腺癌组织中bcl-XL的表达水平，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测其在5个甲状腺癌细胞株的蛋白表达。应用小分子bcl-XL抑制剂ABT-737处理甲状腺癌细胞
目的回顾分析全胸腹主动脉替换术中应用经股静脉至股动脉转流实施腹腔脏器灌注保护的经验。方法2016年9月至2020年8月，50例患者接受股静脉至股动脉转流体外循环辅助下全胸腹主动脉替换。男性30例，女性20例，年龄21～69岁，平均(40.5±12.4)岁。早期25例患者单纯应用部分体外循环技术，2019年11月起开始使用体外循环联合选择性腹腔脏器灌注技术，应用球囊导管经腹腔干、肠系膜上动脉灌注温血