【摘 要】
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目的克隆Ang-1基因,分析其结构特征,构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变的血管渗漏奠定物质基础.方法提取人胎盘组织总RNA,RT-PCR扩增
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目的克隆Ang-1基因,分析其结构特征,构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变的血管渗漏奠定物质基础.方法提取人胎盘组织总RNA,RT-PCR扩增出Ang-1基因片段,并将其克隆到PGEM-T Easy 载体中进行序列分析,再亚克隆到毕氏酵母表达载体pPIC9K中.结果从胎盘组织总RNA中,RT-PCR扩增出1.5kb的cDNA片段,成功构建了PGEM-T/Ang-1载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致.两者成熟区cDNA的核苷酸和氨基酸同源性分别大于99%和98%,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体.结论从人的胎盘中克隆Ang-1基因无突变,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,满足表达蛋白质的需要.
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