【摘 要】
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克隆抗人肿瘤坏死因子（TNF-α）鼠源单抗的可变区基因以构建其单链抗体（ScFv）表达载体,实现在大肠杆菌的表达,并进行ScFv的可溶性纯化与鉴定。采用RT-PCR技术,以前导肽序列的引物
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克隆抗人肿瘤坏死因子（TNF-α）鼠源单抗的可变区基因以构建其单链抗体（ScFv）表达载体,实现在大肠杆菌的表达,并进行ScFv的可溶性纯化与鉴定。采用RT-PCR技术,以前导肽序列的引物从1个分泌抗人TNF-α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因（VL,VH）,构建ScFv基因,将ScFv基因片段与pGEX-4T-1表达载体连接,在大肠杆菌中表达并采用十二烷基肌氨酸钠（Sarkosyl）进行可溶性纯化,最后鉴定其生物活性。结果显示,得到了功能性重排的轻、重链可变区基因,分别构建了VH和VL
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