【摘 要】
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本研究利用生物信息学方法预测梅毒螺旋体（Treponema pallidum,Tp）Trx蛋白的生物学性质。Trx蛋白无信号肽,定位在细胞质。二级结构无规卷曲占41.9%,β片层为55%,使用枯草芽胞杆
【机 构】
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南华大学病原生物学研究所特殊病原体放空湖南省重点实验室; 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心; 南华大学医学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81373230);湖南省高校创新平台开放基金(No.13K081);湖南省科技计划项目(No.2015JC3087);南华大学大学生创新课题(2015-28)共同资助
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本研究利用生物信息学方法预测梅毒螺旋体（Treponema pallidum,Tp）Trx蛋白的生物学性质。Trx蛋白无信号肽,定位在细胞质。二级结构无规卷曲占41.9%,β片层为55%,使用枯草芽胞杆菌Trx蛋白结构（PDB:2gzz.1.A）进行同源建模,获得Trx蛋白三级结构。根据TpTrx基因序列设计引物,以TpDNA为模板,PCR扩增得到大小为318 bp的Trx基因,然后将其连接到pET30a构建重组质粒pET30-Trx,将该重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,得到重组菌大肠杆菌。利用IPTG诱导目的蛋白表达,该质粒编码的重组Trx蛋白分子量约为16 kDa。使用Ni2+亲和层析纯化获得重组Trx蛋白,发现Trx蛋白具有二硫键还原酶活性。利用菌落计数法观察重组大肠杆菌在H2O2胁迫下的存活率,发现能表达Trx蛋白的大肠杆菌存活率高于对照。本研究利用生物信息学方法分析了TpTrx蛋白的性质,并发现它具有抗氧化功能,本研究为解析Tp的抗氧化机制提供实验依据。
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