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摘要：本文参照GB/T5009??171-2003的实验方法，比较了北青六号、肚里黄以及北青三号三个不同品种的青稞苗在不同生长期的SOD酶活力。实验表明25cm的北青六号SOD活性最大，为青稞系列保健品的开发和利用提供了有力参考。
关键词：青稞超氧化物歧化酶 测定活性
青稞是青藏高原裸大麦的俗称，在植物分类学上属于禾本科大麦属大麦的变种之一。其在生长期一般不施用农药，是高原地区真正绿色无污染的农作物。目前，青藏高原青稞种植面积约为40万公顷，占全国青稞面积的95%左右。在青海省，青稞的产量在粮食类作物中占第二位，仅次于春小麦。肚里黄、北青三号以及北青六号是青海省普遍种植的三个品种，均具有耐寒、耐旱、耐瘠薄、稳产和适应性强等优良特性。
超氧化物歧化酶（Super Oxide Dismutase，简称SOD）[1]广泛存在于各类生物体中，可以催化过氧阴离子发生歧化反应，是生物体内清除自由基的首要物质。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的對细胞的伤害。具有抗辐射、防衰老以及防治肿瘤和抗炎等药用功效，SOD这一独特的生理功能使其在医药领域和日用化学工业上具有良好的应用前景[2,3]。
青稞中富含SOD。目前有关青稞中SOD活性的测定未见报道。本文选用肚里黄、北青三号以及北青六号这三个品种的青稞苗作为研究对象，分别测定在不同生长期SOD的活性，对制备青稞系列保健品原材料的选择进行初步研究，旨在为青稞系列保健品的综合开发利用提供理论依据[4]。
1 实验部分
1.1 实验原理
参照GB/T5009??171-2003，将25 ℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位。在碱性条件下，邻苯三酚会发生自氧化，可根据SOD抑制邻苯三酚自氧化能力测定SOD活力。
1.2 试剂与材料
三羟基甲基氨基甲烷（GR，上海复旦科教器材公司）；EDTA??2Na（AR，国药集团化学试剂有限公司）；邻苯三酚（AR，国药集团化学试剂有限公司）；浓盐酸（AR，白银化学试剂厂）；青稞苗（采自青海省湟中县丹麻实验基地）；实验用水为二次蒸馏水。
1.3 仪器
TU-1901型双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；CW130A高效粉碎机（中外合资上海天祥健台制药机械有限公司）；800型离心机（上海手术器械十厂）。
1.4 测定步骤
1.4.1 试剂的配制
A液：PH 8.20 0.1 mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（内含1 mmol/LEDTA??2Na）。称取1.2114 g三羟甲基氨基甲烷和37.2 mgEDTA??2Na溶于62.4 mL 0.1mol/L盐酸溶液中，用蒸馏水定溶至100 mL。B液：4.5 mmol/L邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚56.7 mg溶于少量10 mmol/L盐酸溶液，并定容至100 mL。
1.4.2 超氧化物歧化酶活性的测定
取剪碎的青稞苗样品10.0 g置于研钵中，加入100.0 mL蒸馏水研磨5分钟，移入离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经4000 r/min离心15 min，弃去沉淀，取上清液测定。
在25 ℃左右，于10 mL比色管中依次加入A液2.35 mL，蒸馏水2.00 mL，B液0.15 mL。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325 nm波长条件下初始时和1 min后吸光度值，二者之差为邻苯三酚自氧化速率△A325（min-1）。在25 ℃左右，于10 mL比色管中依次加入20 μL样液，A液2.35 mL，蒸馏水2.00 mL，B液0.15 mL。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325 nm波长条件下初始时和1 min后吸光度值，二者之差为样液抑制邻苯三酚自氧化速率△A??325（min-1）。加入样液的量使抑制邻苯三酚自氧化速率为1/2△A??325（min-1）。据下式计算，即得结果。
SOD活力（u/g）=
抑制率I(%) =
式中：
V-加入样液的体积，mL
△A325-邻苯三酚自氧化速率
△A??325-样液抑制邻苯三酚自氧化速率
D-样液的稀释倍数，本方法中D=1
V1-样液总体积，mL
4.5-反应液总体积，mL
m-样液的质量，mL
2 结果与讨论
2.1 抑制率与SOD用量的关系[5] 按1.4.2实验方法考查SOD 提取液用量对邻苯三酚自氧化速率的影响。由图1可看出, 抑制率随着SOD 的用量增加而增大, 说明抑制率与SOD 的用量基本呈线性关系。
图1 不同用量SOD 提取液对邻苯三酚自氧化速率的影响
2.2 不同品种的青稞苗在不同生长期SOD活性的测定选择北青六号、肚里黄和北青三号这三个品种的青稞苗作为实验对象，按照1.4.2实验方法分别测定其在不同生长期（以苗的高度表示）SOD的活性。由结果可见，随着青稞苗的长高，SOD的活性在初期逐渐增加，北青六号和肚里黄这两种青稞苗在25 cm达到最大（分别为291.176 U/g和273.529 U/g），北青三号在20 cm处即出现最高峰（282.353 U/g），随后其含量逐渐下降；但25cm的北青六号SOD活性最大。因此，选择25cm的北青六号青稞苗作为开发和利用青稞系列保健品的最佳原材料。
3 结论
不同品种的青稞苗在不同生长期SOD的活性存在较大差异，本实验通过SOD活性的测定，对青稞苗的品种及生长期进行分析比较，最终确定生长高度为25 cm的北青六号青稞苗SOD的活性最大，可作为制备青稞系列保健品的最佳原材料，为进一步合理开发青稞系列保健品提供一定的参考价值。
参考文献：
[1] 黎瑞珍,杨庆建,陈贻锐.超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定及其应用研究[J].琼州大学学报,2004,11(5):34-36
[2] 骆爱兰.拟除虫菊酯类农药残留分析研究进展[J].江苏农业学报,2004,20(2):120-125
[3] 吴学霖.农药中毒[M].北京:人民卫生出版社,1988
[4] 张立武,阚建全,周才琼,陈宗道.青稞麦绿素的制备及其抗疲劳和耐缺氧功能评价[D].西南农业大学2005届硕士学位论文,西南农业大学,2005
[5] 徐华杰,王成双,盛良全.银杏叶超氧化物歧化酶(SOD)活性研究[J].阜阳师范学院学报(自然科学版).2006,23(3):37-40
作者简介：王婧（1984-），女，汉族，山西省介休市人，青海师范大学化学系07级研究生。
关键词：青稞超氧化物歧化酶 测定活性
青稞是青藏高原裸大麦的俗称，在植物分类学上属于禾本科大麦属大麦的变种之一。其在生长期一般不施用农药，是高原地区真正绿色无污染的农作物。目前，青藏高原青稞种植面积约为40万公顷，占全国青稞面积的95%左右。在青海省，青稞的产量在粮食类作物中占第二位，仅次于春小麦。肚里黄、北青三号以及北青六号是青海省普遍种植的三个品种，均具有耐寒、耐旱、耐瘠薄、稳产和适应性强等优良特性。
超氧化物歧化酶（Super Oxide Dismutase，简称SOD）[1]广泛存在于各类生物体中，可以催化过氧阴离子发生歧化反应，是生物体内清除自由基的首要物质。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的對细胞的伤害。具有抗辐射、防衰老以及防治肿瘤和抗炎等药用功效，SOD这一独特的生理功能使其在医药领域和日用化学工业上具有良好的应用前景[2,3]。
青稞中富含SOD。目前有关青稞中SOD活性的测定未见报道。本文选用肚里黄、北青三号以及北青六号这三个品种的青稞苗作为研究对象，分别测定在不同生长期SOD的活性，对制备青稞系列保健品原材料的选择进行初步研究，旨在为青稞系列保健品的综合开发利用提供理论依据[4]。
1 实验部分
1.1 实验原理
参照GB/T5009??171-2003，将25 ℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位。在碱性条件下，邻苯三酚会发生自氧化，可根据SOD抑制邻苯三酚自氧化能力测定SOD活力。
1.2 试剂与材料
三羟基甲基氨基甲烷（GR，上海复旦科教器材公司）；EDTA??2Na（AR，国药集团化学试剂有限公司）；邻苯三酚（AR，国药集团化学试剂有限公司）；浓盐酸（AR，白银化学试剂厂）；青稞苗（采自青海省湟中县丹麻实验基地）；实验用水为二次蒸馏水。
1.3 仪器
TU-1901型双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；CW130A高效粉碎机（中外合资上海天祥健台制药机械有限公司）；800型离心机（上海手术器械十厂）。
1.4 测定步骤
1.4.1 试剂的配制
A液：PH 8.20 0.1 mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（内含1 mmol/LEDTA??2Na）。称取1.2114 g三羟甲基氨基甲烷和37.2 mgEDTA??2Na溶于62.4 mL 0.1mol/L盐酸溶液中，用蒸馏水定溶至100 mL。B液：4.5 mmol/L邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚56.7 mg溶于少量10 mmol/L盐酸溶液，并定容至100 mL。
1.4.2 超氧化物歧化酶活性的测定
取剪碎的青稞苗样品10.0 g置于研钵中，加入100.0 mL蒸馏水研磨5分钟，移入离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经4000 r/min离心15 min，弃去沉淀，取上清液测定。
在25 ℃左右，于10 mL比色管中依次加入A液2.35 mL，蒸馏水2.00 mL，B液0.15 mL。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325 nm波长条件下初始时和1 min后吸光度值，二者之差为邻苯三酚自氧化速率△A325（min-1）。在25 ℃左右，于10 mL比色管中依次加入20 μL样液，A液2.35 mL，蒸馏水2.00 mL，B液0.15 mL。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325 nm波长条件下初始时和1 min后吸光度值，二者之差为样液抑制邻苯三酚自氧化速率△A??325（min-1）。加入样液的量使抑制邻苯三酚自氧化速率为1/2△A??325（min-1）。据下式计算，即得结果。
SOD活力（u/g）=
抑制率I(%) =
式中：
V-加入样液的体积，mL
△A325-邻苯三酚自氧化速率
△A??325-样液抑制邻苯三酚自氧化速率
D-样液的稀释倍数，本方法中D=1
V1-样液总体积，mL
4.5-反应液总体积，mL
m-样液的质量，mL
2 结果与讨论
2.1 抑制率与SOD用量的关系[5] 按1.4.2实验方法考查SOD 提取液用量对邻苯三酚自氧化速率的影响。由图1可看出, 抑制率随着SOD 的用量增加而增大, 说明抑制率与SOD 的用量基本呈线性关系。
图1 不同用量SOD 提取液对邻苯三酚自氧化速率的影响
2.2 不同品种的青稞苗在不同生长期SOD活性的测定选择北青六号、肚里黄和北青三号这三个品种的青稞苗作为实验对象，按照1.4.2实验方法分别测定其在不同生长期（以苗的高度表示）SOD的活性。由结果可见，随着青稞苗的长高，SOD的活性在初期逐渐增加，北青六号和肚里黄这两种青稞苗在25 cm达到最大（分别为291.176 U/g和273.529 U/g），北青三号在20 cm处即出现最高峰（282.353 U/g），随后其含量逐渐下降；但25cm的北青六号SOD活性最大。因此，选择25cm的北青六号青稞苗作为开发和利用青稞系列保健品的最佳原材料。
3 结论
不同品种的青稞苗在不同生长期SOD的活性存在较大差异，本实验通过SOD活性的测定，对青稞苗的品种及生长期进行分析比较，最终确定生长高度为25 cm的北青六号青稞苗SOD的活性最大，可作为制备青稞系列保健品的最佳原材料，为进一步合理开发青稞系列保健品提供一定的参考价值。
参考文献：
[1] 黎瑞珍,杨庆建,陈贻锐.超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定及其应用研究[J].琼州大学学报,2004,11(5):34-36
[2] 骆爱兰.拟除虫菊酯类农药残留分析研究进展[J].江苏农业学报,2004,20(2):120-125
[3] 吴学霖.农药中毒[M].北京:人民卫生出版社,1988
[4] 张立武,阚建全,周才琼,陈宗道.青稞麦绿素的制备及其抗疲劳和耐缺氧功能评价[D].西南农业大学2005届硕士学位论文,西南农业大学,2005
[5] 徐华杰,王成双,盛良全.银杏叶超氧化物歧化酶(SOD)活性研究[J].阜阳师范学院学报(自然科学版).2006,23(3):37-40
作者简介：王婧（1984-），女，汉族，山西省介休市人，青海师范大学化学系07级研究生。