【摘 要】
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转录激活因子3 (ATF3)是一种早期应激反应基因,能够影响细胞增殖、分化、转化和凋亡.中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是重组蛋白、单克隆抗体等生物大分子药物生产的主要宿主细胞之一.
【机 构】
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上海交通大学药学院,细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心,上海200240
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转录激活因子3 (ATF3)是一种早期应激反应基因,能够影响细胞增殖、分化、转化和凋亡.中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是重组蛋白、单克隆抗体等生物大分子药物生产的主要宿主细胞之一.ATF3能够促进肿瘤细胞的增殖及抗凋亡等作用,理论上可对CHO细胞发挥调节作用.因此本试验对CHO细胞中ATF3的甲基化水平进行深入研究,通过重亚硫酸盐测序法检测CHO-K1细胞中ATF3的甲基化水平,发现ATF启动子区域的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)甲基化高达90％.为了进一步研究ATF3甲基化的上游调控机制,构建了敲除DNA甲基转移酶3A (DNMT3A)的CHO-K1来研究DNMT3A对ATF3甲基化水平的影响.结果 表明,敲除DNMT3A后,CHO-K1细胞中的ATF3甲基化水平降低至0,这充分证明了DNMT3A对ATF的甲基化的调控作用,为CHO细胞的ATF3基因调控研究以及后续CHO细胞株改造提供了理论依据.
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