【摘 要】
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[目的]构建含有克里米亚-刚果出血热病毒特征序列的克隆载体.[方法]设计RT-PCR引物及反应体系,从克里米亚-刚果出血热病毒RNA中扩增获得目的序列,进行分离纯化和回收,将纯化
【机 构】
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辽宁国际旅行卫生保健中心,辽宁大连,116001
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[目的]构建含有克里米亚-刚果出血热病毒特征序列的克隆载体.[方法]设计RT-PCR引物及反应体系,从克里米亚-刚果出血热病毒RNA中扩增获得目的序列,进行分离纯化和回收,将纯化的扩增片段与pMD18-T载体进行连接,进行酶切鉴定与测序鉴定.[结果]确定检测克里米亚-刚果出血热病毒一步法RT-PCR的反应条件及体系,引物终浓度为400nmol/L,反应条件为:50℃ 30 min,94℃4 min,94℃ 30s,57℃ 30 s,72℃30 s,35cycles.成功将CCHF的特征序列片段克隆,pMD18-T载体经DNA测序鉴定正确.[结论]构建的pMD18-CCHF质粒,可用于克里米亚-刚果出血热病毒RT-PCR实验的阳性对照.
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