【摘 要】
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目的体外检测miR-210基因诱导犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和成血管方向分化的作用,探讨目的基因双重调控作用。方法构建慢病毒载体Lenti-miR-210和Lenti-Lac Z,并分别用Le
【机 构】
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安徽医科大学口腔医学院,上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔种植科
【基金项目】
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国家自然科学基金(编号:31370983;81371114;81371190);安徽省自然科学基金(编号:1408085MKL29);安徽省杰出青年科学基金(编号:1508085J08);高校优秀青年人才支持计划重点项目(编号:gxyq ZD2016058);安徽医科大学“青年拔尖人才支持计划”
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目的体外检测miR-210基因诱导犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和成血管方向分化的作用,探讨目的基因双重调控作用。方法构建慢病毒载体Lenti-miR-210和Lenti-Lac Z,并分别用Lenti-Lac Z和Lenti-miR-210转染BMSCs。分别在目的基因转染BMSCs的第0、1、4、7、14、21天提取mRNA和蛋白,利用RT-PCR和Western blot检测关键性成血管和成骨因子[血管内皮生长因子(VEGF)和核心结合因子2(Runx2)]的表达。同时在目的基因转染的第21天通过碱性磷酸酶(ALP)和钙结节茜素红染色观察体外骨形成的情况。结果慢病毒载体Lenti-miR-210和Lenti-Lac Z能够成功转入BMSCs中,并在目的基因转染后,miR-210能够显著上调BMSCs关键性成骨和成血管因子VEGF和Runx2的表达(P<0.05);碱性磷酸酶和茜素红染色显示,相对于BMSCs组和Lenti-LacZ组,Lenti-miR-210组能够明显促进BMSCs的成骨向分化。结论 miR-210可以显著促进BMSCs向成骨和成血管方向分化,这为将来的体内实验奠定了基础。
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