【摘 要】
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目的 构建慢病毒-血管内皮生长因子165(VEGF165)载体并转染脂肪组织来源干细胞(ADSCs)以得到用于基因治疗的种子细胞.方法 通过聚合酶链反应(PCR)方法将EHS10016895048 53139
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目的 构建慢病毒-血管内皮生长因子165(VEGF165)载体并转染脂肪组织来源干细胞(ADSCs)以得到用于基因治疗的种子细胞.方法 通过聚合酶链反应(PCR)方法将EHS10016895048 5313912克隆突变成VEGF165(NM_001025368)转录本后采用三质粒系统(pGC-FU、pHelp1.0和pHelp2.0)进行包装慢病毒.通过定时定量PCR测定滴度后使用慢病毒-VEGF165转染ADSCs.免疫荧光、Western blot鉴定VEGF165在ADSCs中的表达.结果 PCR(535 bp)、DNA测序、Western blot(49×103)检测证明成功构建的载体为VEGF165与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体.实时定量PCR确定病毒滴度达到2×108TU/ml.慢病毒-VEGF165载体转染ADSCs后经免疫荧光验证约95%ADSCs可表达VEGF165同时Western blot也证明基因稳定表达.结论 通过获得稳定表达VEGF165的ADSCs,为血管性疾病特别是糖尿病性勃起障碍的治疗奠定了基础.
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