【摘 要】
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通过PCR方法从Bacillus subtilis基因组DNA中扩增出谷氨酰胺合成酶基因(glnA),克隆至表达载体pET28b,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG及乳糖诱导表达.SDS-PAGE分析
【机 构】
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南京师范大学生命科学学院,无锡江南大学科技园,南京大学生命科学学院
【基金项目】
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南京师范大学校科研和教改项目，江苏省教委科研项目
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通过PCR方法从Bacillus subtilis基因组DNA中扩增出谷氨酰胺合成酶基因(glnA),克隆至表达载体pET28b,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG及乳糖诱导表达.SDS-PAGE分析表明,所表达的谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,简称GS)为可溶性蛋白,约占总菌蛋白的80%.利用表达的GS蛋白N端的6×His-Tag对GS进行亲和层析,将获得的纯蛋白进行酶活性测定.结果表明,纯化的GS合成反应的最适温度为60℃,最适pH为6.5,Mn
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