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目的
探讨Pokemon在肾癌发生发展中的作用。
方法培养人肾透明细胞腺癌细胞786-0,构建抑制Pokemon表达的慢病毒载体Lv-shPokemon,细胞培养后随机分为两组,转染组加入Lv-shPokemon慢病毒载体,阴性对照组加入Lv-scrambled慢病毒载体,感染复数(MOI)为50。首先用蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞Pokemon蛋白的表达,证实转染是否成功。然后用噻唑蓝(MTT)实验检测两组786-0肾癌细胞增殖,并比较增殖率。最后用Transwell小室检测786-0肾癌细胞侵袭能力,并在显微镜下计算穿膜细胞数。应用SPSS 17.0统计软件分析,计量资料用均值±标准差(Mean±SD)表示,两样本均数比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。
结果慢病毒转染后,Lv-shPokemon组Pokemon的蛋白表达水平(相对于内参的平均灰度值为0.111±0.019)明显低于Lv-scrambled组(相对于内参的平均灰度值为0.759±0.084),差异有统计学意义(t=16.784,P<0.01)。与Lv-scrambled组肾癌细胞增殖率[(100.00±11.82)%]比较,Lv-shPokemon组肾癌细胞的增殖率[(58.00±6.69)%]明显降低,差异有统计学意义(t=6.862,P<0.01)。Lv-shPokemon组肾癌细胞的穿膜数[(29±4)个]明显低于Lv-scrambled组[(120±17)个],差异有统计学意义(t=11.651,P<0.01)。
结论抑制Pokemon可以降低肾癌细胞的增殖和减弱肾癌细胞的侵袭能力。