【摘要】 目的 探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）中FHIT和COX-2蛋白的表达相关性及其与肺癌发展之间的关系。方法 应用免疫组织化学SP法检测57例NSCLC组织及6例良性病变肺组织中FHIT和COX-2蛋白的表达。结果 NSCLC组织FHIT和COX-2蛋白的阳性表达率分别为22.80%和82.46%。FHIT在NSCLC组织中表达缺失，与肿瘤的组织分型、TNM分期和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关（P>0.05）。COX-2在NSCLC组织中高表达与肿瘤的组织分型、TNM分期、肿瘤大小及分化程度和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄无关（P>0.05）。癌组织中FHIT和COX-2蛋白的表达呈显著负相关（r0.342，P0.004）。结论 FHIT和COX-2蛋白在非小细胞肺癌中表达成显著负相关,提示两者在非小细胞肺癌的发生发展中可能存在重要的协同作用。 【关键词】 FHIT； COX-2； 非小细胞肺癌； 免疫组织化学 Study on the expression and correlation of FHIT and COX-2 in non-small cell lung cancer ¹YANG Yong-shan, WANG Yan.¹The Third Clinical Hospital of Harbin Medical University, Daqing, 163318, China 【Abstract】 Objective To investigate the correlation of the expression of FHIT and COX-2 proteins and study its role in the development of non-small cell lung cancer （NSCLC）.Methods The expression of FHIT and COX-2 proteins was detected by SP immunohistochemical technique in 57 cases of non-small cell lung cancer and 6 cases of benign lung lesions.Results The positive rates of FHIT and COX-2 proteins were 22.80% and 82.46% respectively in NSCLC. Reduction of FHIT had no relation to the sex or age of the patients, sizes of tumors and tumor differentiation（P>0.05）.The expression of FHIT was closely related to the types of histology, stages of TNM and lymph node metastasis（P<0.05）.The expression of COX-2 was not related to the sex or age of the patients （P>0.05）. The expression of COX-2 was closely related to the types of histology, stages of TNM, sizes of tumors, tumor differentiation and lymph node metastasis（P<0.05）. The expression of FHIT protein has a significant negaitive correlation with that of COX-2 protein in NSCLC（r0.342, P0.009）.Conclusion There is a significant negative correlation between high expressions of FHIT and COX-2 proteins in NSCLC. The high expressions of FHIT and COX-2 proteins are possibly related to the development and metastasis of NSCLC. 【Key words】 FHIT； COX-2； Non-small lung cancer； Immunohistochemistry 肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率逐年增加，其中非小细胞肺癌占大多数。细胞癌变是多因素、多阶段、多基因变异的结果。FHIT基因为多种肿瘤的候选抑癌基因，其表达频繁地降低或缺失，在细胞增殖、转化及肿瘤发生中具有十分重要的作用^［1，2］。COX-2是可诱导型表达蛋白，与肿瘤的发生和发展有着密切关系^［3］。已知两种基因与肺癌的发生发展密切相关，但两者在肺癌中表达的相关性尚未见报道。本研究旨在探讨FHIT蛋白和COX-2蛋白的表达相关性及其与非小细胞肺癌发生发展的关系。 1 材料与方法 1.1 标本来源 标本随机取自哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理科2000～2002年经肺部手术切除的NSCLC组织蜡块57例和良性病变肺组织蜡块6例。所有材料均经福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm后连续切片，常规染色后，复查病理诊断，并按WHO标准分型、分级。其中腺癌26例，鳞癌27例，其它4例；良性病变肺组织6例；高、中、低分化分别为16、11和30例；按肿瘤大小分为D≤3 cm和D>3 cm组，分别为23和34例；其中男38例，女性19例；年龄最小30岁，最大79岁，按年龄分为<60岁和≥60 岁两组，分别为30和27例，平均58岁；所有病例均有淋巴结转移情况记录，其中转移者19例。临床分期依据1997年国际抗癌联盟（UICC）TNM分期标准，其中Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ期41例。所有病例术前均未接受放疗、化疗。 1.2 试剂及染色法 COX-2多克隆抗体（兔抗）及链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化染色试剂盒均为美国Santa Cruz公司产品；FHIT多克隆抗体（兔抗）和Envision试剂盒均为Zymed公司产品，均购自北京中山生物技术有限公司。用免疫组化SP法。实验步骤按SP试剂盒说明书进行,DAB显色。将已知阳性的肺癌切片作为阳性对照,用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。 1.3 结果判定 FHIT和COX-2阳性反应产物均呈棕黄色颗粒状，定位在细胞浆中。参照有关文献^［4］,每张切片随机选取10个高倍视野,每个高倍视野计数100个癌细胞,计算阳性细胞百分率，结果判定采用盲法，并由病理科医师对染色结果复阅核定。判定标准: （1）阴性（-）：阳性细胞数<5%；（2）弱阳性（+）：阳性细胞数在5%～25%之间, 染色淡；（3）中度阳性（++）：阳性细胞数26%～50%之间, 染色清晰；（4）强阳性（+++）: 阳性细胞数>50%，染色强。 1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0 统计软件进行分析,组间比较采用χ²检验及Fisher确切概率法, 相关性分析采用Spearman等级相关分析，结果均以P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 FHIT和COX-2在NSCLC和肺良性病变组织中的表达 如表1所示，57例NSCLC标本中，FHIT蛋白阳性表达13例，阳性率22.80%；COX-2蛋白阳性表达47例，阳性率82.46%。6例良性病变肺组织标本中FHIT蛋白全部阳性表达，COX-2蛋白全部阴性表达。两组标本中的FHIT和COX-2表达差异有统计学意义（P<0.05）。 表1 FHIT和COX-2在NSCLC和肺良性病变组织中的表达 2.2 FHIT和COX-2蛋白表达与NSCLC临床病理特征的关系 由表2可知，在NSCLC组织中，FHIT在NSCLC组织中表达缺失，与肿瘤的组织分型、TNM分期和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关（P>0.05）。COX-2在NSCLC组织中高表达，与肿瘤的组织分型、TNM分期、肿瘤大小及分化程度和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄无关（P>0.05）。 表2 FHIT和COX-2表达与NSCLC临床病理参数的关系 2.3 NSCLC组织中FHIT和COX-2表达的相关性 由表3可见，57例NSCLC组织中，Spearman 等级相关分析显示FHIT和COX-2表达呈显著负相关（r0.342，P0.004）。 表3 NSCLC 组织中FHIT和COX-2蛋白表达的相关性 注：r0.342，P0.004 3 讨论 脆性组氨酸三联体（fragilehistidinetriad，FHIT）基因是于1996年首次克隆出的一个新的候选抑癌基因,其定位于染色体3p14.2,跨越人类基因组中一个最普遍的脆性位点FRA3B及肾细胞癌相关性断裂点t。大量研究表明,FHIT基因在肺癌等肿瘤中均存在异常。本实验研究发现，FHIT在NSCLC组织中表达缺失，与肿瘤的组织分型、TNM分期和淋巴结转移关系密切，与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关。 环氧化酶是由两种基因型，即COX-1 和COX-2组成的催化前列腺素合成的限速酶。其中COX-2在大多数组织正常生理条件下并不存在，仅在细胞受到刺激时迅速合成，催化花生四烯酸产生多种前列腺素类物质，通过多种途径，参与包括炎症、肿瘤等多种病理生理过程。研究表明，COX-2在NSCLC组织中高表达与肿瘤的组织分型、TNM分期、肿瘤大小及分化程度和淋巴结转移关系密切，与患者的性别、年龄无关。 两者在肺癌中的相关性尚未见报道。本实验中57例肺癌组织中有FHIT大量表达缺失同时COX-2高表达，呈明显的负相关（r0.342，P0.004），提示两者在非小细胞肺癌的发生、发展中可能存在重要的协同作用，两者的联合检测可能对肺癌的诊治及预后有重要意义，可能会成为肺癌的靶向治疗的新目标，但需进一步的研究来探讨两基因间的具体作用机制。 参 考 文 献 ［1］ Lee YC, Wu CT, Shih JY, et al. Frequent allelic deletion at the FHIT locus assosiate with p53 overexpression in squamous cell carcinoma subtype of Taiwanese non-small-cell lung cancers. Br J Cancer, 2004, 90（12）: 2378-2383. ［2］ Pekarsky Y, Palamarchuk A, Huebner K, et al. FHIT as tumou supperssor: mechanisms and therapeutic opportunitiesp. Cancer Biol Ther, 2002, 1（3）: 232-236. ［3］ 王志伟，范向军，朱铭岩，等.PFC，TNF-α和NO在猪胰腺移植急性排斥反应中的意义.中国普通外科杂志，2004，12（10）：754. ［4］ Hao XP, Willis JE,Pretlow TG, et al. Loss of fragile histidine triad expression in colorectal carcinomas and premalignant lesions. Cancer Res, 2000, 60（1）: 18-21. （收稿日期：2011-05-25） （本文编辑：车艳）