蚕豆叶绿体atpE基因的克隆、测序和表达

来源 :生物化学与生物物理学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a306783805
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蚕豆叶绿体的atpE和atpB基因在叶绿体DNAKpnI酶切的第九条(约4.0kb)片段上,此片段被克隆到载体pUC18中,构成重组质粒pUK1。用玉米叶绿体atpE基因作探针对pUK1的ClaI、EcoRI等的酶切产物进行杂交,确定了蚕豆叶绿体的atpE在ClaI酶切的约0.9kb的片段上。根据pBluescriptKS(+)DNA多聚接头F引物和R引物测序,得到ε亚基基因的完整核苷酸序列。此后,ε亚基基因被克隆到载体pJLA505的多聚接头处,构建了表达质粒pJLA505-atpE,转化E.coli,进行温敏诱导表达。产物经电泳扫描分析,表达量占全菌蛋白的38%以上。蛋白质印迹分析结果表明此表达产物可特异性地与玉米叶绿体CF1的ε亚基抗体反应。大肠杆菌中表达的蚕豆叶绿体atpE基因产物ε亚基蛋白以包含体形式存在于细菌中,经纯化后测定其具有天然ε亚基蛋白的生物功能。
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