【摘 要】
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目前，在国内用于预防猪伪狂犬病的疫苗主要是基因缺失的弱毒（Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１），为了有效地区分弱毒免疫猪和野毒感染猪，本实验分别建立了一种通用和一种鉴别ＰＣＲ诊断方法。根据已发表的伪狂犬病病毒（ＰｒＶ）ｇＢ、
【机 构】
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中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;
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目前，在国内用于预防猪伪狂犬病的疫苗主要是基因缺失的弱毒（Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１），为了有效地区分弱毒免疫猪和野毒感染猪，本实验分别建立了一种通用和一种鉴别ＰＣＲ诊断方法。根据已发表的伪狂犬病病毒（ＰｒＶ）ｇＢ、ｇＥ基因的序列，设计并合成了两对引物：ＰＢ１／ＰＢ２和ＰＥ１／ＰＥ２。以疫苗株Ｂａｒｔｈａｋ－６１及野毒株Ｓ、Ｓｕ、Ｆ、Ｌ、Ｙ及闽Ａ（Ｍｉｎ－Ａ）ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，结果显示用引物ＰＢ１／ＰＢ２从７株病毒ＤＮＡ中均扩增出了一条长３７２ｂｐ的片段，经ＨｐａＩ酶切都产生了１２１ｂｐ和２５１ｂｐ两个片段，与设计大小完全相符；用引物ＰＥ１／ＰＥ２仅从６种野毒株ＤＮＡ中扩增出了一条长为５２６ｂｐ片段，经ＳｍａＩ酶切，皆产生了２２２ｂｐ和３０４ｂｐ的两个片段，这些ＰＣＲ产物大小与设计也完全相符。现用的弱毒疫苗Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１是ｇＩ／ｇＥ双基因缺失的病毒，因此根据ｇＥ基因序列设计的引物ＰＥ１／ＰＥ２只能扩增ＰｒＶ野毒不能扩增疫苗株Ｂａｒｔｈａ－ｋ６１，此ＰＣＲ可用于鉴别ＰｒＶ强、弱毒。ＰｒＶｇＢ是主要免疫原性糖蛋白，也是病毒感染和复制所必需的，因此无论强毒和弱毒均有此基因，根据ｇＢ基因序列设计的引物ＰＢ?
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