【摘 要】
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选取西部马脑炎病毒代表株进行序列比对分析,选择保守区域,设计合成引物和TaqMan探针。经对反应体系和条件进行优化,建立了检测西部马脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法,应用
【机 构】
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中国农业大学动物医学院; 北京出入境检验检疫局;
【基金项目】
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质检公益性行业科研专项“马重大外来虫媒病抗体、核酸快速检测技术研究”(201010033)
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选取西部马脑炎病毒代表株进行序列比对分析,选择保守区域,设计合成引物和TaqMan探针。经对反应体系和条件进行优化,建立了检测西部马脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法,应用建立的方法对西部马脑炎病毒核酸、东部马脑炎病毒核酸、马动脉炎病毒核酸、马疱疹病毒1型核酸、马流感病毒H3N8亚型核酸进行检测,结果表明建立的方法只能检出西部马脑炎病毒核酸,与另外4种病毒核酸无交叉反应。进一步通过体外转录制备了西部马脑炎病毒McMillan株7442~10011的cRNA片段,经拷贝数计算、稀释、分装、均匀性和稳定性检验后,作为质控品对建立的方法进行评价。结果显示,所建立的方法其分析灵敏度可达10拷贝。对197份进口马血样品检测用时仅4小时,表明该检测技术快速、灵敏、特异。因此,本研究建立的方法可作为技术储备用于进口马匹的疫病筛查。
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