探讨miR-429对大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和上皮-间质转化(EMT)的调控作用。
方法用组织块法提取、培养和分离PSCs，通过免疫荧光染色法检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs。取新鲜分离的第2代PSCs，采用脂质体法将miR-429的模拟物(miR-429 mimic) 和无意义小分子阴性对照片段(miR-NC)分别转染大鼠PSCs，再用10 μg/L TGF-β1刺激PSCs。采用蛋白质印迹法检测细胞a-SMA、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cad)及EMT相关蛋白TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达量；实时荧光定量PCR法检测a-SMA、vimentin、E-cad mRNA和miR-429的表达量。
结果培养后PSCs细胞体积变大，伪足发达，细胞间连接减少，脂滴消失， GFAP、desmin表达阳性，α-SMA表达阴性，符合星状细胞的生物学特征。TGF-β1刺激后，大鼠PSCs α-SMA、vimentin、E-cad蛋白的表达量分别为对照组的(1.369±0.878)、(1.518±0.041)、(0.549±0.076)倍，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。转染miR-429 mimic且经TGF-β1刺激后，PSCs的α-SMA、vimentin、E-cad mRNA表达量是转染miR-NC组的(0.423±0.038)、(0.652±0.043)、(2.235±0.045)倍，蛋白表达量是(0.683±0.053)、(0.548±0.049)、(1.548±0.038)倍，差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01)；TGF-β/Smad通路的TGF-β1、p-Smad2/3的相对表达量是miR-NC组的(0.459±0.038)、 (0.525±0.029)倍，差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01)。
结论上调miR-429的表达可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化的影响及逆转EMT，其可能的机制是抑制TGF-β1介导的TGF-β/Smad信号转导通路。