【摘 要】
:
目的:克隆嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)胞外段编码序列,体外表达和鉴定重组P2X7R胞外段蛋白。方法:采用德泰生物密码子优化软件MaxCodonTMOptimization Program (V13),对P2X7R胞
【机 构】
:
潍坊医学院医学检验学系纳米医学技术研究所潍坊医学院临床检验诊断学山东省"十二五"高校重点实验室;
【基金项目】
:
国家自然科学基金(81770915,81301737);国家级大学生创新创业训练计划项目(201810438025)资助
论文部分内容阅读
目的:克隆嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)胞外段编码序列,体外表达和鉴定重组P2X7R胞外段蛋白。方法:采用德泰生物密码子优化软件MaxCodonTMOptimization Program (V13),对P2X7R胞外段蛋白氨基酸编码序列进行优化并设计PCR扩增引物。采用重叠PCR扩增目标基因,通过限制性酶切位点NdeⅠ和HindⅢ,将P2X7R胞外段编码序列定向插入原核表达载体pET30a(+),构建pET30a-P2X7R重组表达质粒,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+)表达菌种中,进行融合表达,诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。重组蛋白含6×His纯化标签,亲和层析(Ni-IDA树脂)纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot鉴定纯化产物。结果:PCR扩增的P2X7R胞外段蛋白编码序列长度为885 bp,成功构建重组pET30a-P2X7R质粒,并转化至E.coli BL21(DE3+)菌株中。融合型表达的重组蛋白分子量约为34 kD,可被抗His标签单克隆抗体特异性识别。结论:成功克隆P2X7R胞外段蛋白编码序列、诱导表达并纯化了重组P2X7R胞外段蛋白,为今后制备抗人P2X7R胞外段蛋白的单克隆抗体奠定了坚实的基础。
其他文献
<正>为了体现科学探究思想,优化课堂教学,在人教版现行高中化学教材第二册第一章第二节"氨和铵盐"的第一课时"氨"。进行如下设计。
以CaCl2为氯化剂,碳粉为还原剂,采用氯化焙烧—盐酸浸取的方法处理铬渣,铬渣中的铬以CrCl3的形式被回收。在m(铬渣)∶m(碳粉)为10∶2.0、m(CaCl2)∶m(铬渣)为0.4、焙烧温度为
目的了解医学专业大学生的生命意义感及其影响因素,为提高大学生生命意义感提供理论依据。方法按年级和专业分层,随机抽取某医科大学本科生共395名。采用生命态度量表及自编
叙述了PLC技术的概念,分析了PLC技术在矿山机电控制中应用的必要性和优势,探讨了PLC技术在矿山机电控制中的应用。
目的:采用斑马鱼动物模型研究一氧化碳释放分子(CORM-3)对X射线辐照后斑马鱼胚胎发育的作用,并初步探讨CORM-3的作用机制。材料和方法:用不同浓度的CORM-3溶液(0、6.25、12.5
基于《隐藏的祖先:妙香国的传说和社会》的阅读,理解洱海地区作为南诏大理王朝中心经历元朝的收编之后,成为帝国的边疆这一历程。连瑞枝透过对大理白族地区的传说、书画和经卷
"人民"一词是一个具有复杂内涵的政治概念。建党初期,中共对"人民""国民"两概念的使用并没有明显的侧重。随着国共合作的开展,革命形势的高涨,"人民"因克服了"国民"这一概念
人口老龄化的迅速发展,使得老年人的健康成为全社会关注的一个焦点。老年人的健康除与饮食有关外,身体与精神方面的锻炼亦极为重要。快步走是所有健身活动中最简单易行且适于
2011年,海峡两岸四地有关辛亥革命的学术纪念活动丰富多彩、新意迭出。百年后回望辛亥革命这桩改变中国发展方向的大事件,我们不仅对它的历史意义看得更清楚,也意识到今后学
本文对某车型车门区域DTS进行分解找出主要偏差源,在多种组合装配策略中提炼出两种应用较广的控制策略。利用3DCS公差仿真软件模拟车门区域的装配过程,并测量车门区域各测量