【摘 要】
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利用PCR方法从pEGFP-N1中扩增pCMV-EGFP,从人基因组rDNA基因家族靶基因插入位点两侧分别扩增两条基因打靶同源重组引导序列DS1和DS2,将DS1、DS2片段插入pMD19-pCMV-EGFP中,构
【机 构】
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暨南大学生命科学技术学院,佛山科学技术学院医学院
【基金项目】
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基金项目：国家自然科学基金项目（30671194,30871395）,广东省科技攻关计划项目（2006820101012）导师周天鸿教授对本人学业进行了悉心指导,谨此致谢!
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利用PCR方法从pEGFP-N1中扩增pCMV-EGFP,从人基因组rDNA基因家族靶基因插入位点两侧分别扩增两条基因打靶同源重组引导序列DS1和DS2,将DS1、DS2片段插入pMD19-pCMV-EGFP中,构建成多位点基因打靶载体pMD19-DS2-pCMV-EGFP-DS1。通过脂质体将其转染至HEK293细胞内。通过荧光检测和PCR、测序等方法,检测和评价定点整合效率。试验结果表明,外源基因EGFP在转染细胞中持续稳定表达,EGFP定点整合率约为4%,不经药物筛选大大提高了整合效率,比传统的基因
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