【摘 要】
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为了构建伪狂犬病病毒新兴株(PRV-XX)TK/gE双基因缺失的重组病毒,利用PCR从PRV-XX株基因组分别扩增gE基因两侧序列LgE和RgE,将LgE和RgE克隆到pUC19载体,构建转移质粒pUC19-gE
【机 构】
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肇庆大华农生物药品有限公司 广东省兽用生物制品生物技术研究与应用企业重点实验室; 华南农业大学 兽医学院;
【基金项目】
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肇庆市科技计划项目(2012C003)
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为了构建伪狂犬病病毒新兴株(PRV-XX)TK/gE双基因缺失的重组病毒,利用PCR从PRV-XX株基因组分别扩增gE基因两侧序列LgE和RgE,将LgE和RgE克隆到pUC19载体,构建转移质粒pUC19-gE/HEK;进一步将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达盒克隆到质粒中,构建转移质粒pUC19-gE/EGFP;先用构建好的pUC19-TK/EGFP质粒与PRV-XX基因组共转染BHK21细胞,噬斑筛选纯化获得重组病毒PRV/TK-/EGFP;再用pUC19-TK/HEK与PRV/TK-/EGFP病毒基因组共转染BHK21细胞,噬斑筛选纯化获得重组病毒PRV/TK-。在此基础上,用同样方法获得重组病毒PRV/TK-/gE-/EGFP和PRV/TK-/gE-。重组病毒PRV/TK-/gE-的生物学特性研究结果表明:TK/gE缺失稳定,30代次内未见缺失位点变化;TK/gE缺失后,重组病毒PRV/TK-/gE-毒力是亲本毒株PRV-XX株的1/48,但不影响其在ST细胞上的增殖;PRV/TK-/gE-对猪安全有效,其最小免疫剂量为105.0 TCID50,免疫水平与某进口伪狂犬病疫苗相当。
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