【摘 要】
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目的 建立一种基于CRISPR-Cas13a的埃博拉病毒快速、现场核酸检测方法. 方法 根据埃博拉病毒基因组保守区序列设计合成特异性RT-RAA引物及crRNA,采用荧光法CRISPR检测技术筛
【机 构】
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军事医学研究院微生物流行病研究所,北京100071;中国人民解放军疾病预防控制中心
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目的 建立一种基于CRISPR-Cas13a的埃博拉病毒快速、现场核酸检测方法. 方法 根据埃博拉病毒基因组保守区序列设计合成特异性RT-RAA引物及crRNA,采用荧光法CRISPR检测技术筛选灵敏度高的crRNA;利用“消线法”CRISPR试纸读取CRISPR检测结果;通过检测梯度稀释的埃博拉病毒核酸及其他病原体核酸评价该方法的灵敏度及特异性. 结果 从5条靶向埃博拉病毒NP基因保守序列的crRNA中筛选出1条检测灵敏度高的crRNA.利用该crRNA建立了基于“消线法”试纸的CRISPR-Cas13a埃博拉病毒核酸检测方法,其灵敏度为1拷贝/μL,与荧光法CRISPR和RT-qPCR法一致,优于普通RT-PCR法(101拷贝/μl)和RT-RAA扩增法(102拷贝/μ1).采用该方法检测7种其他病原体核酸,结果均为阴性. 结论 建立的试纸法CRISPR埃博拉病毒核酸检测方法快速、灵敏、特异,且无需专业核酸检测设备,为实现痕量埃博拉病毒核酸的现场检测提供了新方法.
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