【摘 要】
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目的 构建由前列腺特异抗原(PSA)启动子介导、表达带有蛋白转导结构域序列(TAT)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白pPSA.TAT-EGFP表达载体,使TAT所携带的目的 蛋白能够在靶
【机 构】
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山东大学医学院生物化学与分子生物学教研室,济南,250012
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目的 构建由前列腺特异抗原(PSA)启动子介导、表达带有蛋白转导结构域序列(TAT)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白pPSA.TAT-EGFP表达载体,使TAT所携带的目的 蛋白能够在靶组织中高效表达,提高其特异性及表达效率.方法 以pEGFP-1载体为模板,设计包含TAT序列的引物,PCR技术扩增含有酶切位点的小片段SalI-TAT-EGFP-Not I,经胶回收纯化,连接到T克隆载体.双酶切及测序鉴定后,提取质粒、双酶切后胶回收得到目的 小片段.含有PSA启动子的pPSA-EGFP载体经Sal I和Not I双酶切后,胶回收含有PSA启动子序列的大片段.过夜连接目的 小片段与PSA启动子大片段,得到pPSA-TAT-EGFP表达载体.转化、筛选阳性克隆后酶切与测序鉴定.将构建载体分别转染前列腺癌细胞和大肠癌细胞检测其表达情况.结果 成功构建pPSA-TAT-EGFP表达载体.转染结果显示其能够在前列腺癌细胞中特异性表达.结论 引入了PSA组织特异性启动子的TAT所携带的目的 蛋白能够在前列腺癌组织中表达.
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