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目的 建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定人血清中睾酮(T)、双氢睾酮(DHT)、雄烯二酮(AD)、脱氢表雄酮(DHEA)和17α羟孕酮(17OHP)的方法,并确定表观健康人群血清中5种甾体激素的参考区间.方法 血清样品沉淀后经SOLAμHRP固相萃取柱纯化,采用Poroshell 120 EC-C18色谱柱分离,用含0.05％甲酸的30％乙腈溶液和90％乙腈溶液梯度洗脱.采用电喷雾正离子多反应监测模式检测,采用同位素内标法定量检测甾体激素的浓度.对建立的UPLC-MS/MS方法进行全面的性能验证,并建立适用于上海地区人群人血清5种甾体激素的参考区间.结果 UPLC-MS/MS检测人血清中5种甾体激素的最低定量限为0.01～0.10 ng/mL,标准曲线范围覆盖1000倍,r2值均>0.9995,线性良好,样本经稀释后可报告范围覆盖5000倍.5种分析物批内与批间的准确度为95.0％～105.6％,精密度均<8％.8种结构类似物对目标分析物均无干扰,高三酰甘油不影响检测结果,溶血可导致DHEA检测值降低.各分析物的提取回收率为60.5％～93.3％,内标校正后无明显的基质效应.血清样品室温放置4 h、-25～-15℃放置30 d、-90～-70℃放置100 d,甾体激素均可被稳定测量.T和17OHP项目参加2019年国家卫生健康委临床检验中心全国内分泌正确度验证质谱法调查,UPLC-MS/MS检测结果与靶值的偏差为-5.00％～0.38％.用UPLC-MS/MS检测367名体检者血清,结果显示,男性与女性之间5种甾体激素浓度差异均有统计学意义(P50岁(124名)2个年龄亚组,2个亚组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 建立并验证了一种可同时检测人血清中5种甾体激素的UPLC-MS/MS方法,该方法适用于上海市徐汇区中心医院中心实验室的参考区间.