【摘 要】
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目的 构建HCV NS5B的真核表达载体pCDNA3.1(-)HCV NS5B,研究HCV NS5B在Hun 7.5细胞中表达导致的糖、脂类代谢相关基因的差异表达.方法 真核表达载体pCDNA3.1(-)HCV NS5B转染Hun 7.5细胞,培养48h后提取细胞蛋白进行Western blot检测；将pcDNA3.1(-)HCV NS5B和pcDNA3.1(-)载体分别转染Hun 7.5细胞后,
【机 构】
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100048北京中国人民解放军总医院第一附属医院消化科,100048北京中国人民解放军总医院第一附属医院消化科,100048北京中国人民解放军总医院第一附属医院消化科
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目的 构建HCV NS5B的真核表达载体pCDNA3.1(-)HCV NS5B,研究HCV NS5B在Hun 7.5细胞中表达导致的糖、脂类代谢相关基因的差异表达.方法 真核表达载体pCDNA3.1(-)HCV NS5B转染Hun 7.5细胞,培养48h后提取细胞蛋白进行Western blot检测；将pcDNA3.1(-)HCV NS5B和pcDNA3.1(-)载体分别转染Hun 7.5细胞后,提取mRNA并逆转录为cDNA,运用基因表达谱芯片技术分析糖、脂类代谢相关的差异表达基因.结果 成功构建了HCV NS5B的真核表达载体pCDNA3.1(-) HCV NS5B;转染Hun 7.5细胞后HCV NSSB在细胞内可以表达；基因表达谱芯片技术筛选,分别发现了其中5个显著上调和3个显著下调的糖、脂类代谢相关基因.结论 筛选HCVNS5B转染Hun 7.5细胞后的糖、脂类物质代谢相关的差异表达基因,从而为丙型肝炎病毒感染合并糖尿病、脂肪肝等代谢性疾病分子生物学机制的研究提供重要依据。
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