【摘 要】
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为阐明人清道夫受体AI (hSR-AI)的功能及在动脉粥样硬化发生中的作用,本研究首先构建了含鼠 tie-1启动子和人清道夫受体AI cDNA的表达载体,经酶切及测序鉴定后,用显微注射的
【机 构】
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衡阳医学院分子生物学研究中心,香港大学分子生物学研究所,Department of Pharmacology,湖南医科大学药理学教研室
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为阐明人清道夫受体AI (hSR-AI)的功能及在动脉粥样硬化发生中的作用,本研究首先构建了含鼠 tie-1启动子和人清道夫受体AI cDNA的表达载体,经酶切及测序鉴定后,用显微注射的方法将制备好的tie-1-hSR-A-BGH poly A片段注入受精卵,将注射后存活的受精卵移入IC R假孕母鼠,产下的仔鼠经聚合酶链反应和Southern blot分析,筛选出整合有外源目的基因的阳性转基因鼠;对小鼠组织RNA行逆转录聚合酶链反应及组织切片免疫组织化学染色,检测人清道夫受体AI在小鼠体内的表达水平及表达部位;光镜及电镜观察转基因鼠血管及其它组织的病理变化.结果发现, 重组Tie-1/hSR-AI质粒中鼠tie-1启动子和人清道夫受体AI cDNA序列正确,显微注射后存活的 561枚受精卵分别移入19只ICR假孕母鼠,有13只受孕,共产下56只仔鼠,存活54只,经过整合检测 ,检出7只阳性鼠,整合效率为13%.在G1、 G2、 G3 代及纯合子转基因鼠中PCR阳性率分别为47.8%、 71.3%、 75.0% 和 100%.5只雄性转基因鼠的主动脉、肾、肝等组织中均有人清道夫受体 AI表达,且主要集中在血管的内皮细胞上;转基因鼠主动脉内皮细胞明显水肿,表面呈多囊状和虫蚀样改变,胞质中有较多水泡,中膜有糖原沉积样灶性病变,平滑肌细胞中亦有水肿 ;血浆甘油三酯水平明显高于非C57BL/6鼠(P
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