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摘 要 比较了不同提取方法对香菇多糖得率的影响。结果表明，以0.4mol/l的盐酸为浸提液提取未纯化的香菇多糖，提取率为24%，0.8mol/L NaOH为浸提液提取的未纯化的香菇多糖，提取率为15.58%，较热水提法提取率7.56%有大量提高，而其活性则有待进一步研究。
关键词 提取方法 香菇多糖 苯酚硫酸法 提取率
中图分类号：Q539 文献标识码：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdkz.2015.06.029
The Study of Extration Effect on Lentinan by
Different Extration Methods
ZHANG Rui， ZENG Wanyong， GUO Huanzhong， LI Jinhua
（School of Biology and Pharmaceutical Engineering， Wuhan Polytechnic University， Wuhan， Hubei 430023）
Abstract Different extraction methods for leninan contents were compared. The results show that the raw extration rate reaches 24% by 0.4mol/l of hydrochloric acid， while it is 15.58% by 0.8mol/l of NaOH. Both of the methods are far better than hot water extration method， which is 7.56% in the study. The activity of the extrations should be investigated futhermore.
Key words extraction method; Lentinan; PhenolSulphate colorimetry; rate of extraction
香菇（Lentinus edodes）是一种集营养、保健和药用功效于一体的可直接利用的药食两用菌类，广泛地分布于我国各省区，在我国有悠久的食用历史。香菇中含多种活性成分，其中香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、降血糖等生物活性，是非特异免疫刺激剂，并且在临床上得到广泛应用。①
大量工作证明香菇多糖能增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力，提高机体抗肿瘤功能且无毒副作用，是理想的免疫促进剂。香菇多糖的抗肿瘤活性与分子量有关，而且其硫酸酯化合物具有抑制爱滋病毒的作用。②林桂兰等对香菇多糖抗食用油脂的氧化作用、清除羟基自由基的作用、清除超氧阴离子自由基的作用以及在模拟胃液条件下清除的作用进行了研究，结果表明，香菇多糖提取物具有体外抗氧化性能（林桂兰等，2006）。
香菇多糖的提取方法一直是研究的热点。前人采用了高压热水浸提法、③超声波分步酶解法④等提取香菇多糖。本实验以神农架产香菇为材料，比较了不同提取方法对香菇多糖得率的影响。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
实验材料 干香菇购自神农架。
蛋白酶K为Merck公司产品;无水酒精，浓盐酸，氢氧化钠，苯酚，浓硫酸，正丁醇，氯仿，30%双氧水，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，氯化钠，铁氰化钾，三氯乙酸，六水氯化铁，三羟甲基氨基甲烷，邻苯三酚，七水硫酸亚铁，水杨酸等，以上试剂均为分析纯。
1.2 香菇多糖的提取
1.2.1 香菇粉的制备
将干香菇在烘箱内80℃烘干至恒重，粉碎机磨碎成粉，过60目筛，备用。
1.2.2 香菇多糖提取
（1）热水浸提法：⑤取香菇粉10g于锥形瓶，加入200ml蒸馏水，在80℃恒温水浴上回流浸提2h。用滤布过滤，分离滤液和残渣（滤渣在水中反复浸取2次，最后合并滤液）;合并滤液，以3000r/min离心20min。取部分上清液，稀释60倍，用苯酚硫酸法测多糖浓度。⑥
（2）酸浸提法：分别取香菇粉10g于5个锥形瓶中，水浴加热温度为80℃，冷凝回流，料液比1：20，按照盐酸浓度0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol/L加热2h。后续步骤同（1）。
（3）碱浸提法：分别取香菇粉10g于5个锥形瓶中，水浴加热温度为80℃，冷凝回流，料液比1：20，按照氢氧化钠溶液浓度0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mol/L加热2h。后续步骤同（1）。
1.2.3 香菇多糖的分离、纯化
取香菇粉10g于锥形瓶，加入200ml蒸馏水，在80℃恒温水浴上回流浸提2h。用滤布过滤，分离滤液和残渣（滤渣在水中反复浸取2次，最后合并滤液）;合并滤液，以3000r/min离心20min。收集全部上清液，经蛋白酶k处理、Sevag法去蛋白、双氧水漂白、⑦醇沉、复溶，苯酚硫酸法测香菇多糖含量。
1.3 葡萄糖标准曲线绘制
称取无水葡萄糖14.8mg，加水溶解，定容至100mL。分别取0ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，加水至2.0ml，再加lml 5%苯酚溶液，迅速加入浓硫酸5ml，摇匀，静置20min，在490nm波长处测定吸光值，绘制标准曲线。⑧
2 结果与分析
2.1 不同提取方法获得多糖溶液颜色
实验发现，不同提取方法得到的溶液颜色存在很大差别，总体来说，浸提后原液颜色较深，醇沉后溶液颜色变浅。碱法提取的溶液颜色较酸提和水提法获得的溶液颜色深，而酸提和水提的颜色较浅（见表1）。 表1 不同提取方法得到的多糖溶液外观
2.2 苯酚硫酸法测定总糖标准曲线
根据1.3的方法获得的结果绘制葡萄糖标准曲线，得到标准曲线如下（见图1）。该标准曲线回归方程为： = 0.0067+0.0879，R2= 0.9967 ，线性范围：0～150 g。
图1 苯酚硫酸法测定总糖含量标准曲线
2.3 不同提取方法对香菇多糖提取率的影响
比较了不同提取方法获得溶液的吸光值，发现盐酸浓度及NaOH浓度对提取率都有很大影响。盐酸浓度在0～0.4mol/l区间随浓度升高提取率升高，但进一步提高酸浓度则提取率下降。NaOH浓度则在0～0.8mol/l区间与提取率呈正相关，碱浓度进一步提高则提取率下降。
比较酸碱提取法的最适浓度发现，盐酸浸提时，0.4mol/l HCl提取率最高，吸光值为0.8246，折算提取率为24.0%（见图1）;NaOH浸提时，0.8 mol/l NaOH提取率最高，吸光值为0.5940，折算提取率为15.5%（见图2）;而热水法提取的吸光值为0.3104，折算提取率为7.56%。因此，从提取率来看，酸浸提法>碱浸提法>水浸提法，酸浸提时，盐酸最适浓度为0.4mol/l，碱提时，NaOH最适浓度为0.8mol/l。
图2 酸浸提法及热水浸提法提取液吸光值
图3 碱浸提法及热水浸提法提取液吸光值
3 结论与讨论
近年来，香菇多糖因具有增强免疫能力，抗癌等活性受到消费者的青睐，已经有很多研究者对其提取工艺进行过研究，提取率也各有不同。王广慧等（2014）超声波协同高压热水浸提法，提取率为7.83%。本文采用普通热水浸提法得率为7.56%，与前人报道结果基本一致。
本文研究结果表明，不同提取方法对香菇多糖提取率影响较大，酸提法和碱提法的提取率都大大高于热水浸提法，这可能是因为酸碱溶解了大量的单糖及其他物质有关;相同的提取方法，提取液溶剂的浓度对香菇多糖提取率及抗氧化活性有一定影响。在提取率为主要考虑因素时，酸浸提法有较大优势;在综合考虑提取率和提取的香菇多糖的抗氧化活性时（另文叙述），碱浸提法较好。而酸提法和碱提法获得的香菇多糖的其它活性有待进一步研究。
不同地区香菇多糖含量存在很大差异。本实验采用神农架产香菇，采用水提法获得多糖提取率为7.56%，同已有文献报道相比，初步认为其多糖含量较高，不同产地香菇多糖含量比较仍需进一步研究证实。
*通讯作者：李金华
武汉轻工大学大学生科研项目
注释
① 郝强.酸提香菇多糖的提取分离、结构鉴定及抗氧化活性研究.华中农业大学硕士学位论文，2008.
② 张俐纳，张平义等.香菇多糖的成分及其分子量研究[J].高等学校化学学报，1998.19（9）：1513-1517.
③ 王广慧，于德涵.高压热水浸提法提取香菇多糖工艺优化[J].江苏农业科学，2014.42（6）：272-272.
④ 金小花，司文会，张野等.超声波—分步酶解法提取香菇多糖的研究.安徽农业科学，2014.42（25）：8756，8759.
⑤ 徐怀德.天然产物提取工艺学[M].中国轻工业出版社，2013.2.
⑥ 田光辉.香菇多糖提取工艺的优化[J].延安大学学报，2002.21（2）：46-48.
⑦ 陈静，耿安静，徐晓飞.香菇多糖的过氧化氢脱色工艺研究[J].工艺技术，2010（3）：293-295.
⑧ 陈晓光，韦藤幼等.内部沸腾法提取香菇多糖的工艺优化[J].食品科学，2011.32（10）：31-34.
关键词 提取方法 香菇多糖 苯酚硫酸法 提取率
中图分类号：Q539 文献标识码：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdkz.2015.06.029
The Study of Extration Effect on Lentinan by
Different Extration Methods
ZHANG Rui， ZENG Wanyong， GUO Huanzhong， LI Jinhua
（School of Biology and Pharmaceutical Engineering， Wuhan Polytechnic University， Wuhan， Hubei 430023）
Abstract Different extraction methods for leninan contents were compared. The results show that the raw extration rate reaches 24% by 0.4mol/l of hydrochloric acid， while it is 15.58% by 0.8mol/l of NaOH. Both of the methods are far better than hot water extration method， which is 7.56% in the study. The activity of the extrations should be investigated futhermore.
Key words extraction method; Lentinan; PhenolSulphate colorimetry; rate of extraction
香菇（Lentinus edodes）是一种集营养、保健和药用功效于一体的可直接利用的药食两用菌类，广泛地分布于我国各省区，在我国有悠久的食用历史。香菇中含多种活性成分，其中香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、降血糖等生物活性，是非特异免疫刺激剂，并且在临床上得到广泛应用。①
大量工作证明香菇多糖能增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力，提高机体抗肿瘤功能且无毒副作用，是理想的免疫促进剂。香菇多糖的抗肿瘤活性与分子量有关，而且其硫酸酯化合物具有抑制爱滋病毒的作用。②林桂兰等对香菇多糖抗食用油脂的氧化作用、清除羟基自由基的作用、清除超氧阴离子自由基的作用以及在模拟胃液条件下清除的作用进行了研究，结果表明，香菇多糖提取物具有体外抗氧化性能（林桂兰等，2006）。
香菇多糖的提取方法一直是研究的热点。前人采用了高压热水浸提法、③超声波分步酶解法④等提取香菇多糖。本实验以神农架产香菇为材料，比较了不同提取方法对香菇多糖得率的影响。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
实验材料 干香菇购自神农架。
蛋白酶K为Merck公司产品;无水酒精，浓盐酸，氢氧化钠，苯酚，浓硫酸，正丁醇，氯仿，30%双氧水，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，氯化钠，铁氰化钾，三氯乙酸，六水氯化铁，三羟甲基氨基甲烷，邻苯三酚，七水硫酸亚铁，水杨酸等，以上试剂均为分析纯。
1.2 香菇多糖的提取
1.2.1 香菇粉的制备
将干香菇在烘箱内80℃烘干至恒重，粉碎机磨碎成粉，过60目筛，备用。
1.2.2 香菇多糖提取
（1）热水浸提法：⑤取香菇粉10g于锥形瓶，加入200ml蒸馏水，在80℃恒温水浴上回流浸提2h。用滤布过滤，分离滤液和残渣（滤渣在水中反复浸取2次，最后合并滤液）;合并滤液，以3000r/min离心20min。取部分上清液，稀释60倍，用苯酚硫酸法测多糖浓度。⑥
（2）酸浸提法：分别取香菇粉10g于5个锥形瓶中，水浴加热温度为80℃，冷凝回流，料液比1：20，按照盐酸浓度0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol/L加热2h。后续步骤同（1）。
（3）碱浸提法：分别取香菇粉10g于5个锥形瓶中，水浴加热温度为80℃，冷凝回流，料液比1：20，按照氢氧化钠溶液浓度0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mol/L加热2h。后续步骤同（1）。
1.2.3 香菇多糖的分离、纯化
取香菇粉10g于锥形瓶，加入200ml蒸馏水，在80℃恒温水浴上回流浸提2h。用滤布过滤，分离滤液和残渣（滤渣在水中反复浸取2次，最后合并滤液）;合并滤液，以3000r/min离心20min。收集全部上清液，经蛋白酶k处理、Sevag法去蛋白、双氧水漂白、⑦醇沉、复溶，苯酚硫酸法测香菇多糖含量。
1.3 葡萄糖标准曲线绘制
称取无水葡萄糖14.8mg，加水溶解，定容至100mL。分别取0ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，加水至2.0ml，再加lml 5%苯酚溶液，迅速加入浓硫酸5ml，摇匀，静置20min，在490nm波长处测定吸光值，绘制标准曲线。⑧
2 结果与分析
2.1 不同提取方法获得多糖溶液颜色
实验发现，不同提取方法得到的溶液颜色存在很大差别，总体来说，浸提后原液颜色较深，醇沉后溶液颜色变浅。碱法提取的溶液颜色较酸提和水提法获得的溶液颜色深，而酸提和水提的颜色较浅（见表1）。 表1 不同提取方法得到的多糖溶液外观
2.2 苯酚硫酸法测定总糖标准曲线
根据1.3的方法获得的结果绘制葡萄糖标准曲线，得到标准曲线如下（见图1）。该标准曲线回归方程为： = 0.0067+0.0879，R2= 0.9967 ，线性范围：0～150 g。
图1 苯酚硫酸法测定总糖含量标准曲线
2.3 不同提取方法对香菇多糖提取率的影响
比较了不同提取方法获得溶液的吸光值，发现盐酸浓度及NaOH浓度对提取率都有很大影响。盐酸浓度在0～0.4mol/l区间随浓度升高提取率升高，但进一步提高酸浓度则提取率下降。NaOH浓度则在0～0.8mol/l区间与提取率呈正相关，碱浓度进一步提高则提取率下降。
比较酸碱提取法的最适浓度发现，盐酸浸提时，0.4mol/l HCl提取率最高，吸光值为0.8246，折算提取率为24.0%（见图1）;NaOH浸提时，0.8 mol/l NaOH提取率最高，吸光值为0.5940，折算提取率为15.5%（见图2）;而热水法提取的吸光值为0.3104，折算提取率为7.56%。因此，从提取率来看，酸浸提法>碱浸提法>水浸提法，酸浸提时，盐酸最适浓度为0.4mol/l，碱提时，NaOH最适浓度为0.8mol/l。
图2 酸浸提法及热水浸提法提取液吸光值
图3 碱浸提法及热水浸提法提取液吸光值
3 结论与讨论
近年来，香菇多糖因具有增强免疫能力，抗癌等活性受到消费者的青睐，已经有很多研究者对其提取工艺进行过研究，提取率也各有不同。王广慧等（2014）超声波协同高压热水浸提法，提取率为7.83%。本文采用普通热水浸提法得率为7.56%，与前人报道结果基本一致。
本文研究结果表明，不同提取方法对香菇多糖提取率影响较大，酸提法和碱提法的提取率都大大高于热水浸提法，这可能是因为酸碱溶解了大量的单糖及其他物质有关;相同的提取方法，提取液溶剂的浓度对香菇多糖提取率及抗氧化活性有一定影响。在提取率为主要考虑因素时，酸浸提法有较大优势;在综合考虑提取率和提取的香菇多糖的抗氧化活性时（另文叙述），碱浸提法较好。而酸提法和碱提法获得的香菇多糖的其它活性有待进一步研究。
不同地区香菇多糖含量存在很大差异。本实验采用神农架产香菇，采用水提法获得多糖提取率为7.56%，同已有文献报道相比，初步认为其多糖含量较高，不同产地香菇多糖含量比较仍需进一步研究证实。
*通讯作者：李金华
武汉轻工大学大学生科研项目
注释
① 郝强.酸提香菇多糖的提取分离、结构鉴定及抗氧化活性研究.华中农业大学硕士学位论文，2008.
② 张俐纳，张平义等.香菇多糖的成分及其分子量研究[J].高等学校化学学报，1998.19（9）：1513-1517.
③ 王广慧，于德涵.高压热水浸提法提取香菇多糖工艺优化[J].江苏农业科学，2014.42（6）：272-272.
④ 金小花，司文会，张野等.超声波—分步酶解法提取香菇多糖的研究.安徽农业科学，2014.42（25）：8756，8759.
⑤ 徐怀德.天然产物提取工艺学[M].中国轻工业出版社，2013.2.
⑥ 田光辉.香菇多糖提取工艺的优化[J].延安大学学报，2002.21（2）：46-48.
⑦ 陈静，耿安静，徐晓飞.香菇多糖的过氧化氢脱色工艺研究[J].工艺技术，2010（3）：293-295.
⑧ 陈晓光，韦藤幼等.内部沸腾法提取香菇多糖的工艺优化[J].食品科学，2011.32（10）：31-34.