【摘 要】
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针对沙门氏菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因和志贺氏菌的ipaH基因分别设计LAMP引物,通过对实验条件和反应体系的优化,分析鉴定扩增产物,验证了LAMP方法的灵敏度及特异
【机 构】
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海军工程大学基础部,华中科技大学同济医学院附属协和医院
【基金项目】
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国家部委基金资助项目(9140A26030214JB11418)
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针对沙门氏菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因和志贺氏菌的ipaH基因分别设计LAMP引物,通过对实验条件和反应体系的优化,分析鉴定扩增产物,验证了LAMP方法的灵敏度及特异性,初步建立了针对三种致病菌的多重LAMP(m-LAMP)检测方法。分别对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的基因组DNA提取物梯度浓度稀释后进行实时荧光检测,结果表明:多重LAMP反应体系检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的敏感度均为10fg/反应。对目标菌和其他非目标菌的特异性检测均未出现假阳性和假阴性结果,并通过熔解温度曲线分析对目标菌的扩增产物进行初步鉴定。鉴定结果表明:该方法快速准确、简便高效、特异性强,可广泛应用于致病菌的筛选检测。
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