目的: 建立醋炙三棱乙酸乙酯部位HPLC指纹图谱，并同时测定对羟基苯甲酸、香兰素、对香豆酸和阿魏酸四种酚类物质含量，为三棱药材的质量控制提供借鉴。方法: 富集醋炙三棱乙酸乙酯部位，采用高效液相色谱法，应用Inert Sustain C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相甲醇-0.1%甲酸溶液进行梯度洗脱，检测波长254 nm，流速0.80 m L·min-1，测定对羟基苯甲酸、香兰素、对香豆酸和阿魏酸四种酚类物质的含量。结果: 建立了三棱乙酸乙酯部位的HPLC指纹图谱，检出共有峰16个，各批次药材的相似度均＞0.9；通过对照品比对，确定了指纹图谱中5，8，9，10号峰分别为对羟基苯甲酸、香兰素、对香豆酸和阿魏酸，并对其进行定量分析，结果对羟基苯甲酸的线性范围为0.008～0.924 μg，平均回收率为98.5%，香兰素的线性范围为0.039～4.712μg，平均回收率为101.1%，对香豆酸的线性范围为0.054～6.572μg，平均回收率为100.3%，阿魏酸的线性范围为0.018～2.236ng，平均回收率为101.0%。结论: HPLC指纹图谱方法与含量测定方法简便，结果准确，重复性好，可作为三棱的质量控制方法。