【摘 要】
：
目的 建立快速检测A(H3N2)亚型流行性感冒病毒(简称流感病毒)神经氨酸酶(M)基冈E119V奥司他韦耐药突变位点的双重实时荧光定量逆转录PCR(rRT-PCR)方法.方法 由GenBank获取2000-2012年A(H3N2)亚型流感病毒NA基因序列26条,据此设计特异性靶向NA E119V突变位点的TaqMan-MGB探针进行双重rRT-PCR反应,并利用耐药参考株、临床分离株进行敏感性、特
【机 构】
：
102206北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心世界卫生组织流感参比和研究合作中心,102206北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心世界卫生组织流感参比和研究合作中
论文部分内容阅读
目的 建立快速检测A(H3N2)亚型流行性感冒病毒(简称流感病毒)神经氨酸酶(M)基冈E119V奥司他韦耐药突变位点的双重实时荧光定量逆转录PCR(rRT-PCR)方法.方法 由GenBank获取2000-2012年A(H3N2)亚型流感病毒NA基因序列26条,据此设计特异性靶向NA E119V突变位点的TaqMan-MGB探针进行双重rRT-PCR反应,并利用耐药参考株、临床分离株进行敏感性、特异性和重复性评价.结果 建立了快速检测NA基因E119V位点的双重rRT-PCR检测方法.本方法在A(H3N2)病毒(HA=8)稀释度至10-5仍可检测到荧光信号,病毒滴度的对数与Ct值之间呈线性相关,具有较高的灵敏度；与无耐药突变的A(H3N2)流感病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,两条TaqMan-MGB探针之问不存在交叉反应,具有很高的特异性,并能够检测耐药株和敏感株混合病毒中的耐药突变,在较高浓度的混合病毒中对耐药突变的检测限是5％,在低浓度混合病毒中的检测限是50％.重复性试验得到H3N2-119E和H3N2-119V两组探针批内平均变异系数(CV)值分别为2.32％和0.57％,批间CV值分别为1.77％和0.97％,具有较好的重复性.对其中20株病毒的NA基因序列进行分析,证实这些毒株的NA基因119位点均为谷氨酸(E),表明本研究设计的方法与序列测定结果一致.结论 建立了基于TaqMan-MGB探针检测A(H3N2)亚型流感病毒E119V耐药突变的双重rRT-PCR方法,该方法灵敏、特异、重复性好,实验过程和结果判读简单易操作。
其他文献
目的 调查2011年黑龙江省黑瞎子岛鼠群中钩端螺旋体的感染情况.方法 于2011年4-10月在黑龙江省黑瞎子岛采用夹夜法捕鼠,共捕鼠356只,无菌操作采集鼠肾样品；提取鼠肾脏总核酸,采用PCR方法,利用钩体鉴别引物,对提取的肾脏总核酸中23 S rDNA的482 bp特异性片段进行扩增,以检测鼠体钩端螺旋体感染情况；抽取不同月份的15份阳性扩增产物进行纯化,用双脱氧终止法测序,并利用Mega 4.
目的 了解某铅酸蓄电池生产企业工人血铅水平及其影响因素.方法 于2011年6月底对江苏省某蓄电池生产企业进行职业卫生现场调查,测定存在铅作业岗位空气中铅烟(尘)浓度,并收集2009至2011年共1364人次工人健康监护资料,包括血铅水平、工人一般情况、生活和卫生习惯.应用单因素方差分析和有序多分类logistic逐步回归分析血铅水平影响因素.结果 该厂12个铅烟检测点的铅烟浓度范围为0.008 ～
目的 研究武汉市秋冬季室内外颗粒物暴露对大学生肺功能的影响.方法 采用小样本追踪研究的方法,于2009年10月29日-11月11日(秋季)和2009年12月23日-2010年1月5日(冬季),共测试28 d.通过随机整群抽样法选取武汉市某大学37名19～ 21岁在校大学生,排除呼吸系统疾患及有吸烟史的调查对象,测定其早晚最大呼气流速(peak expiratory flow,PEF),并且监测室内
2011年2月,笔者从宁夏中宁县急性弛缓性麻痹(AFP)监测系统报告的1例AFP患者标本中分离到1株脊髓灰质炎(简称脊灰)Ⅲ型疫苗衍生脊灰病毒(VDPV),并对该患者进行了病原学的连续性监测,现将结果报告如下。
英国牛津大学Ffiedemann研究团队在最近一期《英国医学杂志》上报告，超重或者肥胖儿童患心血管疾病的风险较正常儿童明显提高，差异有统计学意义。该Meta分析纳入2000--2011年期间发表的包括回顾性研究、横断面研究、病例对照研究和随机临床试验设计等63篇文章，收集了约5万名年龄在5～15岁之间的发达国家儿童的数据资料，分析他们的肥胖状况和相关健康风险。研究结果显示，
丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)NS5A基因编码的ISDR、PKRBD和V3等区域氨基酸序列的变异与HCV对干扰素-α( interferon-α,IFN-α)治疗的不同反应性有关[1-6],了解NS5A基因的序列特征及干扰素敏感决定区(IFN Sensitivity Determining Region,ISDR)的氨基酸序列有助于进一步研究中国地区HCV的致病性及HC
水是一种重要的营养成分，如果机体内的水失去平衡，数小时内就会对机体产生不良影响。机体对水的生理需要主要通过饮用普通水、食物和饮料中的水分来满足。关于每天需要喝多少水已经存在很多观点，也有研究发现了饮水与儿童认知的相关性，同时人们越来越关注在美国的膳食中日益增多的含糖饮料，尽管如此，仍缺乏系统的膳食与总水摄入的关系的研究。
2011年12月23日出版的美国《科学》（Science）杂志评出了2012年值得关注的科研领域，共6项，分别如下：1．希格斯玻色子：人们相信，2012年粒子物理学家要么找到苦苦追寻的“上帝粒子”，要么证明它不存在。相关报道：SearchforHiggsBosonYieldsaDefiniteMaybe2．“超光速”中微子：科学家称2012年初可能重现超光速中微子，但是对于时间推迟或者出现中微子没
世界银行报告指出,2010-2030年,中国所有慢性病负担中,脑卒中与心肌梗死的比率将超过50％,尤其是脑卒中对个体的健康和生活造成的危害最大[1].脑卒中作为我国主要死因之一,防控形势十分严峻,有必要对脑卒中疾病负担作及时分析与总结,找到重点干预人群与地区,为脑卒中防控政策的制定提供可靠信息和证据支持.在分析疾病负担时,不仅要考虑死亡,也要考虑患病后的失能情况[2].因此,笔者尝试使用同时考虑疾
为探讨非淋菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis,NGU)患者家庭儿童泌尿生殖道支原体与衣原体感染状况及耐药情况,笔者对732户患者家庭中的812名儿童的泌尿生殖道标本进行了衣原体抗原检测、支原体培养及药敏试验,现将结果报告如下。