【摘 要】
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在采用前期已构建的重组菌E. coli BL21（DE3）/pET20b（+）-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性
【机 构】
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江南大学食品科学与技术国家重点实验室; 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室;
【基金项目】
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国家杰出青年基金(31425020);高等学校学科创新引智计划(B170210)资助项目
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在采用前期已构建的重组菌E. coli BL21（DE3）/pET20b（+）-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9. 8U/mg（NPB水解比活力为1 047. 6 U/mg）,在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略,以进一步提高重组酶在3L罐中的表达水平。优化后的最佳条件及结果为:OD600为75时,恒速流加0. 8g/（L·h）的乳糖溶液,发酵24h后,酶活达到最大值4 788. 0U/ml,约为摇瓶发酵酶活的28倍,与OD600为50时、流加0. 2 g/（L·h）进行诱导的发酵策略（酶活2 233. 0 U/ml）相比,提高幅度约为114. 0%,发酵时间缩短40. 0%。
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