【摘 要】
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目的 本实验的目标是克隆、高效表达牛源无乳链球菌的sip基因抗原优势区序列.并进行其抗原性鉴定.方法 根据GenBank中已公布的牛源无乳链球菌sip基因序列抗原表位序列设计1对
【机 构】
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内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽,028043;内蒙古民族大学动物科技学院
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目的 本实验的目标是克隆、高效表达牛源无乳链球菌的sip基因抗原优势区序列.并进行其抗原性鉴定.方法 根据GenBank中已公布的牛源无乳链球菌sip基因序列抗原表位序列设计1对引物.以无乳链球菌分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位序列.并进行克隆、测序、转化、表达及抗原性鉴定.结果 克隆的sip基因抗原表位序列为897 bp,编码299个氨基酸.与GenBank中公布的牛无乳链球菌sip基因(AF151361)比对后.其相似性为99.8%,氨基酸相似性为99.7%;经高效表达后其可溶性表达率48.7%.重组蛋白的分子质量单位为40.3 ku.经纯化得到纯度在90%以上的SIP蛋白.Western blot显示重组蛋白能被抗无乳链球菌血清识别.结论 本研究成功构建了rSIP-pET30(a)重组质粒.并高效表达SIP,且该重组蛋白具有抗原性,为建立奶牛隐性乳腺炎抗体监测方法与乳中无乳链球菌的检测方法奠定了基础.
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