【摘 要】
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为了能够快速、灵敏、低成本和方便地对市场上的羊奶进行鉴伪,本文基于竞争法原理开发了牛源酪蛋白胶体金免疫层析试纸条并对其进行了评价.通过在纯羊奶中添加不同比例的牛奶,获得含有不同浓度牛源蛋白的羊奶溶液并进行免疫层析试纸条测定,评价了该方法的检测范围和灵敏度,分析了奶制品经蒸煮和酶解处理对试纸条检测结果的影响,评价了该方法对完整的和酶解的纯品牛源α-酪蛋白和β-酪蛋白鉴别能力,制备了酪蛋白抗体亲和柱结合UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS液质联用仪器及Peaks软件测定亲和柱结合分离的多肽序
【机 构】
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南京财经大学食品科学与工程学院/江苏省现代粮食流通与安全江苏高校协同创新中心,江苏南京 210023;生命分析化学国家重点实验室,南京大学化学化工学院,南京大学现代分析中心,江苏南京 210023;南
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为了能够快速、灵敏、低成本和方便地对市场上的羊奶进行鉴伪,本文基于竞争法原理开发了牛源酪蛋白胶体金免疫层析试纸条并对其进行了评价.通过在纯羊奶中添加不同比例的牛奶,获得含有不同浓度牛源蛋白的羊奶溶液并进行免疫层析试纸条测定,评价了该方法的检测范围和灵敏度,分析了奶制品经蒸煮和酶解处理对试纸条检测结果的影响,评价了该方法对完整的和酶解的纯品牛源α-酪蛋白和β-酪蛋白鉴别能力,制备了酪蛋白抗体亲和柱结合UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS液质联用仪器及Peaks软件测定亲和柱结合分离的多肽序列,合成了鉴定到的人工多肽并通过试纸条方法进行检测.结果表明,基于肉眼判断羊奶掺伪定性检出限为1.2 mg/100 g,试纸条消线值为6 mg/100 g,羊奶与牛奶进行煮沸和酶解处理后对检测结果没有影响.将纯牛源α-酪蛋白和β-酪蛋白分别添加到羊奶中后测定发现,该方法无法区分并检验出酶解后的α-酪蛋白和β-酪蛋白.亲和柱结合液质结果表明,酪蛋白经过多种酶联合酶解后得到的大部分多肽并不能与酪蛋白抗体结合,胶体金试纸条方法也无法检测出人工合成多肽.以上研究结果表明,该试纸条方法可以测定羊奶中完整空间结构的牛源酪蛋白,并可以作为有效的工具用于市场上羊奶产品的真实性鉴定.
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