【摘 要】
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利用PCR技术从猪细小病毒的RFDNA模板中扩增了含有VP2 全基因的 2 0kb的基因片段 ,将PCR产物克隆至 pMD18 T载体 ,利用双脱氧末端终止法测定了VP2 全基因的核苷酸序列。将所
【基金项目】
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国家九五重中之重课题 ( 96- 0 -0 3- 0 1- 0 41);湖北省自然科学基金资助 ( 99J10 0 )。
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利用PCR技术从猪细小病毒的RFDNA模板中扩增了含有VP2 全基因的 2 0kb的基因片段 ,将PCR产物克隆至 pMD18 T载体 ,利用双脱氧末端终止法测定了VP2 全基因的核苷酸序列。将所得的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序列进行同源性比较 ,同源性均在 99%以上 ,从而说明该蛋白的碱基序列和氨基酸序列均具有高度的保守性。将VP2 全基因分别克隆入原核表达载体pET15 (b)、pET17(b)和 pET2 8(b)构建成表达质粒 pET15bVP2 、pET17bVP2 和 pET2 8bVP2 ;将含有VP2 基因起始位点至EcoRⅠ切点间的 0 8kb片段克隆入 pET17(b)中构建成表达质粒 pET17bVP2 f。利用上述四种质粒转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导后SDS PAGE检测表达情况 ,结果发现 pET17bVP2 f质粒在 45kD处有一特异性表达带 ,而其它几种质粒均未看到特异性表达带 ,推测VP2 基因 3′端的某些结构可能对VP2 全基因的表达有一定影响。这一结果对研究VP2 基因的结构与功能具有重要意义。
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