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目的：建立双抗原夹心酶联免疫法检测疑似牛奶过敏患者血清特异性抗体。方法：将4种牛奶过敏原P1组分、酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白按质量比3：1：4：2混合作为包被抗原制备酶标反应板；同时4种成分分别标记辣根过氧化物酶制备酶标记抗原。经棋盘滴定确定酶标抗体浓度并最终建立双抗原夹心酶联免疫法检测牛奶特异性抗体。以阴性对照在450nm波长处吸光度（A450）的2．1倍为临界点判定阴、阳性结果，并以德国MEDIWISS酶免疫印记检测试剂检测结果为参比标准计算灵敏度与特异度。结果：本文建立的双抗原夹心酶联免疫法